氟哌啶醇和南极磷虾油对斑马鱼帕金森病的诱发和保护作用研究

发布时间：2021-06-09 06:19

　　斑马鱼（Danio rerio）为鲤科、短担尼鱼属的小型硬骨鱼，对相当一部分化学污染物敏感，是国际标准化组织（ISD）以及国家环境保护局推荐作为毒理学试验的标准鱼类模式动物。随着斑马鱼基因组测序工程的完成，发现斑马鱼的基因与人类的基因具有高度同源性，使得斑马鱼作为一种研究人类疾病的模式动物越来越受到人们的关注。帕金森病（PD）是是目前世界第二大神经变性疾病，在65岁以上老年人中患病率高达1%。但目前其致病机理尚未完全掌握，该病仍不能完全治愈，因此对PD动物模型的研究有助于其致病机理和治疗策略的认识加深。本研究以斑马鱼幼鱼和成鱼为研究对象，利用氟哌啶醇诱导斑马鱼PD模型，并探讨了南极磷虾油对斑马鱼成鱼PD模型的神经保护作用。首先考察了氟哌啶醇对斑马鱼胚胎及幼鱼的神经毒性，初步确定了氟哌啶醇诱导斑马鱼PD的可行性；之后进行了氟哌啶醇对成年斑马鱼急性毒性及病理组织学研究，以比较斑马鱼幼鱼与成鱼建立PD的优势，同时确定成年斑马鱼PD氟哌啶醇剂量；最后探讨了南极磷虾油对斑马鱼成鱼PD模型的神经保护作用。收集斑马鱼受精卵，于6孔培养板中分组处理。由于氟哌啶醇微溶于水，实验采用0.01%DMSO助溶... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 斑马鱼概述
        1.1 斑马鱼生物学特性
        1.2 斑马鱼在毒理学研究中的应用
        1.3 斑马鱼在人类疾病研究中的应用
            1.3.1 造血系统疾病
            1.3.2 心血管疾病
            1.3.3 肾脏疾病
            1.3.4 神经系统疾病
    2 帕金森病研究概述
        2.1 PD 的神经化学和神经病理学特征
        2.2 PD 的致病机理
            2.2.1 蛋白质的错误折叠与聚集
            2.2.2 线粒体功能障碍和氧化应激性
            2.2.3 遗传因素
        2.3 已经建立的 PD 动物模型
            2.3.1 毒素基础模型
            2.3.2 基因基础模型
            2.3.3 神经类药物可逆模型
        2.4 斑马鱼 PD 研究
    3 氟哌啶醇概述
    4 南极磷虾油
    5 立题依据与未来展望
第二章 氟哌啶醇对斑马鱼胚胎及幼鱼的神经毒性研究
    1 实验材料与仪器
        1.1 实验材料
        1.2 试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 斑马鱼胚胎染毒处理及孵化率、畸变率和死亡率的观察
        2.2 7 dpf 斑马鱼幼鱼游泳行为测试
        2.3 免疫组织化学染色法检测 96 hpf 斑马鱼 DA 神经元面积
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 Hal 对斑马鱼胚胎孵化率、死亡率和畸变率的影响
        3.2 Hal 对斑马鱼胚胎发育形态影响
        3.3 Hal 对 7 dpf 斑马鱼幼鱼游泳行为的影响
        3.4 Hal 对斑马鱼幼鱼 DA 能神经元的影响
    4 讨论
    5 小结
第三章 氟哌啶醇对成年斑马鱼急性毒性及组织病理学研究
    1 实验材料与仪器
        1.1 实验动物
        1.2 实验药品
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 预备实验
        2.2 正式实验
        2.3 脑部及内脏组织学形态学结构变化
            2.3.1 固定和洗涤
            2.3.2 乙醇脱水
            2.3.3 透明
            2.3.4 浸蜡
            2.3.5 包埋
            2.3.6 切片、展片与贴片
            2.3.7 HE 染色
        2.4 数据处理
    3 结果
        3.1 预实验确定正式实验氟哌啶醇浓度
        3.2 正式实验斑马鱼急性毒性结果
            3.2.1 急性毒性实验斑马鱼行为学表现
            3.2.2 斑马鱼对氟哌啶醇 48 h 和 96 h LC5038
        3.3 氟哌啶醇对斑马鱼组织器官的影响
            3.3.1 脑
            3.3.2 肝脏
            3.3.3 肾脏
    4 讨论
    5 小结
第四章 南极磷虾油对斑马鱼帕金森病的神经保护作用
    1 实验材料与仪器
        1.1 动物
        1.2 试剂
        1.3 仪器
    2 实验方法
        2.1 斑马鱼的分组处理
        2.2 游泳能力测试
        2.3 呼吸情况和皮肤颜色变化
        2.4 成年斑马鱼免疫组化染色技术
            2.4.1 常规石蜡切片制作
            2.4.2 免疫组化染色
        2.5 统计学处理
    3 结果
        3.1 游泳能力比较
        3.2 呼吸情况变化
        3.3 皮肤颜色变化
        3.4 多巴胺神经元变化
    4 讨论
    5 小结
总结
参考文献
致谢
硕士期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3220113