缺血性脑水肿张力调控机制分析及其相关中西药联合治疗研究

发布时间：2021-06-09 10:31

　　目的:脑水肿通常指脑内含水量的增加,主要是由于血脑屏障的破损（血管源性脑水肿）和外源溶液的流入以及神经细胞肿胀（细胞毒性脑水肿）所致。其中,细胞毒性脑水肿来源于大量星形胶质细胞的体积膨胀。细胞内渗透物质浓度增加时,能导致细胞脂质双分子层承受增大的渗透势能,通过牵拉与细胞膜相连的细胞骨架结构,诱导细胞体积的膨胀进而导致神经细胞的形态和结构改变。同时,胞膜的拉伸也能激活机械敏感离子通道,导致离子如Ca2+等流入,通过调节动力蛋白分子,导致微丝和微管张力的变化。胶质纤维酸性蛋白（GFAP）是星形胶质细胞中的主要中间丝蛋白。渗透压力、微丝和微管张力协同作用细胞骨架中间丝,诱导细胞结构和形态变化。本研究课题通过检测细胞水肿过程中胞内微丝、微管结构张力、中间纤维胶质纤维酸性蛋白张力和细胞质溶液渗透压的变化,识别调控神经细胞水肿的力学调控机制,从而揭示细胞毒性脑水肿与神经细胞内力学活动相关的分子机制。应用微丝、微管解聚因子上游蛋白Slingshot（SSH）和Protein phosphatasa 2A（PP2A）的中药单体抑制剂番泻苷A和斑蝥素以及钙离子抑制剂联合临床治疗药物来降低细胞内张力,治疗... 

【文章来源】：南京中医药大学江苏省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１：?ＧＦＡＰ荧光张力探针的构建和流式分选??Ａ：ＧＦＡＰ?探针由?ＰＣＭＶ－ＧＦＡＰ－ｃｐＣｅｒｕｌｅａｎ－７ａａ－ｃｐＶｅｎｕｓ（ｃｐｓｔＦＲＥＴ）－ＧＦＡＰ（ＧｃｐＧ）组成

小颗粒状蛋白生成。??上述研究表明，我们所设计的ＡｃｐＡ，?ＴｃｐＴ和ＧｃｐＧ探针对细胞骨架和细胞生理过??程产生影响较小，对细胞几乎没有毒性作用（图１－２）。??Ａ?ＧｃｐＧ?ＡｃｐＡ?Ｃｏｎ?ＴｃｐＴ?＾??ＧＦＰ?蝴８＾?１５０１?＿?ｎｓ?ｎ?ｒｍ?，??ｌ５０ｋｌ）ａ?ＳＴａ?１?ｈｍｒｎｍｍ??丨ｉ丨丨麵丨ｉｍ叫—卜：ｉｉｔｉ??Ｃ?Ａｃｔｉｎ?ＧＦＡＰ?Ｍｅｒｇｅ??Ｔｕｂｕｌｉｎ?ＧＦＡＰ?Ｍｅｒｇｅ??ｊＢＩＨＱ??图１－２：微丝、微管和胶质纤维酸性蛋白荧光张力探针验证实验??Ａ：免疫印迹法测定ＭＦ、ＭＴ和ＧＦＡＰ探针的ＧＦＰ和ＧＦＡＰ分子量。Ｂ：四组ＧＦＰ蛋白分子??量相对于ＧＦＡＰ蛋白的半定量分析。Ｃ：转染张力探针后的Ｕ８７细胞，共聚焦激光显微镜??观察对照组和Ｕ８７水肿模型中Ｐ－ａｃｔｉｎ、ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ和ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ的免疫焚光染色（ｎ?＞５，ｎｓ，??ｐ＞?０．０５，?＊＊ｐ＜?０．０１，?＊＊＊ｐ＜?０．００１，标尺＝２０?（ｉｍ）〇??１２??

??图１Ｍ：?ＧｃｐＧ张力探针３Ｄ层扫??注：对等渗条件下表达ＧＦＡＰ探针的星形胶质细胞使用激光共聚焦ｚ轴层扫，对ＦＲＥＴ信??号进行了光学检测（第一行）１６位图像（第二行）（标尺＝２０?ｐｍ）。??４．２?ＧＦＡＰ张力参与细胞形态改变??星形胶质细胞肿胀是细胞毒性脑水肿的一个重要过程，可由细胞间液进入胞内引起。??本研究采用ＧＦＡＰ探针来研究Ｕ８７细胞肿胀中的力学作用。??低渗透压力引起向外的张力导致细胞骨架中间纤维丝产生一定的“拉力”，这与细胞肿??胀、体积增大和细胞骨架结构张力的改变有关。为了测量ＧＦＡＰ在细胞肿胀过程中的张力??变化，配置不同的低渗溶液３００?ｍＯｓｍ／ｋｇ（等渗ＨＥＰＥＳ缓冲液）２００、１００、５０和０（纯水）??ｍＯｓｍ／ｋｇ并将转染探针的Ｕ８７细胞置于不同渗透压力的溶液中进行ＦＲＥＴ实验。实验发??现：随着渗透压的降低，细胞开始膨胀，同时ＧＦＡＰ张力逐渐增大。当渗透压（ＯＰ）降至??０?ｍＯｓｍ／ｋｇ时，细胞随着胞浆渗出而解体，ＧＦＡＰ张力迅速下降。以上结果提示ＧＦＡＰ张??力升高与细胞肿胀和细胞体积增大有关，随着细胞体积的增大，ＧＦＡＰ张力也逐渐升高。??因此

【参考文献】：
期刊论文
[1]脑出血后脑水肿的中医药治疗研究进展[J]. 郭明珠,谭文澜.  大众科技. 2017(08)
[2]下法对急性脑出血血肿吸收及神经功能的影响[J]. 孙韶刚.  中国中医药现代远程教育. 2013(11)



本文编号：3220418