miR-222/GAS5在替莫唑胺所致T98G细胞DNA损伤及细胞毒性中的作用及机制

发布时间：2021-06-22 02:05

　　立题依据多形性胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）为多发于成人颅内的中枢神经系统肿瘤,是一项重大的社会公共卫生问题,目前主要治疗手段为手术切除结合药物化疗。替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）是GBM的一线化疗用药,能使GBM细胞DNA分子发生烷基化（O6-MeG）损伤,致DNA分子双链断裂,细胞死亡。TMZ能高效通过血脑屏障,渗透到脑组织细胞中,在GBM的早期治疗中效果突出。然而,06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（06-methylguanine-methyltrasferase,MGMT）能迅速将TMZ介导生成的06-MeG中的甲基转移至自身的活性半胱氨酸残基上,修复TMZ所致肿瘤细胞的DNA损伤,细胞继续存活,导致耐药。目前,TMZ化疗耐药主要分为两大类:MGMT依赖性与非MGMT依赖性。而MGMT表达异常在胶质瘤细胞对TMZ耐药过程中起着重要作用。GBM细胞中MGMT的表达被证实接受miR-222的负向调控。研究发现,作为长链非编码RNA（lncRNA）的生长停滞特异性转录本5（GAS5）与mir-222存在碱基互补基础上的结合位点,同样接受后者的调控。那么... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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ｍｍ??Ｃ?Ｄ??图３－１转染４８ｈ后正常光镜下细胞外观（１００倍镜下）??Ａ、ｍｉＲ－２２２?ｍｉｍｉｃ?转染?Ｔ９８Ｇ?细胞；Ｂ、Ｉｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ?２０００?转染?Ｔ９８Ｇ?细胞；Ｃ、ｍｉＲ－??２２２?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ?转染?Ｔ９８Ｇ?细胞；Ｄ、Ｔ９８Ｇ?细胞??Ｆｉｇ．３－１?Ｃｅｌｌ?ａｐｐｅａｒａｎｃｅ?ｕｎｄｅｒ?ｎｏｒｍａｌ?ｌｉｇｈｔ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?４８ｈ?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ（ｌＯＯｘ）??Ａ．?Ｔ９８Ｇ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｍｉＲ－２２２?ｍｉｍｉｃ，?Ｂ．Ｔ９８Ｇ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ??ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ?２０００，?Ｃ．Ｔ９８Ｇ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｍｉＲ－２２２?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?Ｄ?ｃｅｌｌｓ??３．２?ｍｉＲ－２２２对Ｔ９８Ｇ细胞的增殖能力的影响??转染处理后，利用ＣＣＫ－８对不同处理组别的Ｔ９８Ｇ细胞的细胞增殖情况??（Ｔ９８Ｇ?组、Ｔ９８Ｇ－ｍｉＲ－?２２２?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ?组、Ｔ９８Ｇ－ｍｉＲ－２２２?ｍｉｍｉｃ?组和?Ｔ９８Ｇ－??ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ?２０００组）进行了检测，借此研宄ｍｉＲ－２２２对Ｔ９８Ｇ细胞增殖能力的??影响（如图３－２所示）。实验结果显示，四组不同处理因素的Ｔ９８Ｇ细胞均呈现??典型的恶性细胞增殖曲线，并没有非癌细胞生长曲线中特征性的细胞生长平台??期出现，符合一般肿瘤细胞的增殖规律。??但是从四组细胞的６天增殖幅度来看

?３．３生物信息学分析ｍｉＲ－２２２序列及其祀基因的预测??如图３－３所示，通过在线软件ＭｉｒＢａｓｅ查询，发现成熟人源ｍｉＲ－２２２以ｈｓａ－??ｍｉＲ－２２２－３ｐ?（?Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ?）?为主，具体碱基序列为?５’－??ＡＧＣＵＡＣＡＵＣＵＧＧＣＵＡＣＵＧＧＧＵ－３?’。选取?ｈｓａ－ｍｉＲ－２２２－３ｐ?进行靶基因的搜索，??可发现ＧＡＳ５与ｒｍＲ－２２２存在靶向结合的情况，具体结合的染色体位置为??ｃｈｒｌ：１７３８３３２６９－１７３８３３２８９，?ａｌｉｇｎＳｃｏｒｅ?为?１４７，提示?ＧＡＳ５?可能接受?ｍｉＲ－２２２?的??表达调控，实际情况以双荧光素酶报告实验对ＧＡＳ５及ｍｉＲ－２２２进行分析确证，??而通过文献查找，我们发现ＸｕｅＹ的研宄已开展相关的实验步骤，并且确证了??ＧＡＳ５与ｍｉＲ－２２２存在靶向结合位点ｆ５５ｌ。??Ｍ１ＭＡＴＱＱＱ４Ｓ６９??ｖＬｙ?ｉ．ＶＬｉｒＪＬ３＆ＳＧ?ｈｓａ－ｍｉＲ－２２２＊??Ｉ?３１＾?－５２


本文编号：3241894