Ca 2+ /CaN/Cbl-b/Akt在缺血及药物预处理中的作用研究

发布时间：2021-06-29 15:54

　　目的：缺血性脑损伤是主要的致死、致残性疾病，为患者家庭和社会带来沉重的负担，但至今尚无有效的治疗策略来改善其预后。短暂的、亚致死性缺血预处理能使细胞和组织对随后发生的长时间的致死性脑缺血损伤起到保护作用，这一现象被称为缺血耐受。磷脂酰基醇3-激酶PI3K/Akt信号通路在缺血预处理过程中发挥神经保护作用。Cbl-b属于Cbl原癌基因家族成员之一。在T细胞中Cbl-b通过泛素化PI3K的P85亚基，负调控PI3K/Akt信号通路，抑制T细胞的活化。Cbl-b对PI3K/Akt通路的负调控作用在T细胞、骨瘤细胞、B细胞、肥大细胞等多种细胞中都有发现。我们研究组先前的研究表明，在大鼠局灶性脑缺血模型中缺血耐受通过抑制Cbl-b、增加磷酸化Akt的表达来抑制细胞凋亡，从而起到神经保护作用。在T细胞内钙水平升高并与钙调素结合，从而使钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）活化，活化的CaN使转录因子NFAT脱磷酸化并转移至核内，NFAT作为一种转录因子调节Cbl-b基因的表达。本研究利用PC12细胞系建立氧糖剥夺缺血耐受模型，观察Ca²⁺/CaN/Cbl-b与PI3... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 泛素连接酶 Cbl-b 参与缺血预处理对 PI3K/Akt 通路的调控
    前言
    材料与方法
        1. 材料
            1.1 细胞株
            1.2 试剂
            1.3 仪器
        2. 实验方法
            2.1 PC12 细胞培养
            2.2 氧糖剥夺
            2.3 氧糖剥夺预处理
            2.4 MTT 检测细胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 细胞核染色检测凋亡细胞
            2.6 Real time PCR
            2.7 蛋白质免疫印迹（Western blot）
            2.8 统计学处理
    结果
        1. 预处理防止 OGD 诱导的细胞死亡
        2. Cbl-b 参与 OGD 预处理过程
        3. Cbl-b 对 OGD 预处理的反应大于 Akt 的激活
        4. OGD 预处理过程中 Akt 活性调节 GSK3β磷酸化
        5. Akt 活性在 OGD 预处理过程中调控细胞的凋亡
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 Ca~(2+)/CaN 参与缺血预处理对 Cbl-b 的调控
    前言
    材料与方法
        1. 材料
            1.1 细胞株
            1.2 试剂
        2. 实验方法
            2.1 PC12 细胞培养
            2.2 氧糖剥夺
            2.3 氧糖剥夺预处理
            2.4 MTT 检测细胞存活率
            2.5 蛋白质免疫印迹（Western Blot）
    结果
        1. OGD 缺血预处理降低缺血导致 CaN 表达的增加
        2. 不同时间点 CaN 与 Cbl-b 的对应表达
        3. A23187 对预处理组 CaN 和 Cbl-b 表达的影响
        4. 钙离子调控药物在缺血过程中对 CaN 和 Cbl-b 表达的影响
    讨论
    结论
    参考文献
第三部分 Ca~(2+)/CaN/Cbl-b/Akt 在尼莫地平和 MK801 药物预处理中的作用研究
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 细胞株
            1.2 试剂
        2. 实验方法
            2.1 PC12 细胞培养
            2.2 氧糖剥夺
            2.3 氧糖剥夺预处理
            2.4 MTT 检测细胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 细胞核染色检测凋亡细胞
            2.6 蛋白质免疫印迹（Western Blot）
    结果
        1. 尼莫地平或 MK801 预处理抑制 OGD 诱导的细胞死亡
        2. 尼莫地平或 MK801 预处理对 CaN、Cbl-b、PI3K 及 p-GSK3 β表达的影响
        3. 尼莫地平或 M K 801 预处理调控细胞的凋亡
    讨论
    结论
    参考文献
综述
    参考文献
附录
攻读学位期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]caspase-3抑制药和钙拮抗药联合应用对氧糖剥夺性神经元缺血损害的保护作用[J]. 张拥波,董为伟,王得新.  中国现代神经疾病杂志. 2007(01)
[2]大鼠心肌缺血预适应相关基因5的克隆与特性分析[J]. 王建设,袁灿,王慷慨,王尧玲,刘梅冬,刘可,肖献忠.  中国动脉硬化杂志. 2006(03)
[3]环孢霉素A对老龄大鼠慢性脑灌注不足认知障碍的效用[J]. 刘之荣,李露斯,卞晓红,范文辉.  中国神经精神疾病杂志. 2001(01)



本文编号：3256723