慢病毒介导的CHPF下调调控CCL2对人脑胶质瘤U87细胞的影响
发布时间：2021-07-04 02:46
研究背景及目的:软骨素聚合因子（Chondroitin polymerizing factor,CHPF）是新发现的,一类跨膜蛋白（II型）。最新研究发现,CHPF在头颈部鳞状癌、喉癌、结直肠癌中表达水平升高,并可能与肿瘤的发生的关系密切。本课题组在早期研究已经发现,在脑胶质瘤的肿瘤组织中的CHPF的表达量要高于在对照的正常脑组织中的表达量。故本研究拟在前期研究的基础上,拟构建靶向下调CHPF表达的慢病毒载体,探讨脑胶质瘤U87细胞下调CHPF基因表达后侵袭及增殖的影响及与单核细胞趋化蛋白1（MCP-1,CCL2）的关系及作用机制。研究方法:1.悉心培养人脑胶质瘤的U87细胞系,构建靶向敲底CHPF表达的慢病毒表达载体,并感染人脑胶质瘤U87细胞。根据荧光情况判断转染成功效率。2.实验共分为三个组:空白对照组、NC-shRNA组和CHPF-shRNA组。3.采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组细胞CHPF的mRNA的水平。蛋白质印迹法用于检测实验各组细胞CHPF的蛋白的水平。4.利用CCK8的实验方法检测慢病毒CHPF-shRNA感染后各组胶质瘤U87细胞增殖能力的改变。利用流式...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜检测72小时慢病毒载体CHPFshRNA转染后的U87细胞的荧光
pression levels of CHPF protein in U87 cells after transfection with CHPF-shd by Western blot.测 CHPF-shRNA 转染胶质瘤 U87 细胞后检测 CHPF 蛋白的表达水平8 法检测转染 CHPF-shRNA 后 U87 细胞增殖水平改变检测结果显示，U87 细胞中转入 CHPF-shRNA 后，与空白对 组比较，CHPF-shRNA 组细胞的增殖能力明显减弱（P 值均＜ 照组与 NC-shRNA 组相比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）示。结果表明，抑制 CHPF 表达能显著抑制 U87 细胞的增殖。
Fig.6 Flow cytometry showing the cell cycles of U87 cells after transfection of CHPF-shRNA图 6 流式细胞术的检测周期方法检测转染 CHPF-shRNA 后三组细胞周期情况3.7 流式细胞术分析 U87 细胞感染 CHPF-shRNA 后凋亡水平的改变实验结果：空白组的凋亡率为（7.31±2.16）%，NC-shRNA 组为（7.15±1.07）%，CHPF shRNA 组为（13.97±1.70）%。与空白对照组及 NC-shRNA 组相比，CHPFshRNA 组细胞的凋亡率明显升高，差异有统计学意义（P 值均＜ 0.05），如图 7 所示。NC-shRNA 组与空白组比较，差异无显著性。结果表明 CHPF 表达受抑制后明显促进胶质瘤 U87 细胞的凋亡水平。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Over-expression of LRIG1 Suppresses Biological Function of Pituitary Adenoma via Attenuation of PI3K/AKT and Ras/Raf/ERK Pathways In Vivo and In Vitro[J]. 程世奇,范恒怡,徐新,高伟伟,吕世刚,叶敏华,吴淼经,沈晓黎,程祖珏,祝新根,张焱. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[2]慢病毒介导的RWDD3沉默对人胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响[J]. 范阳华,祝新根,吕世刚,吴淼经,柴毅,叶敏华,肖兵,吴雷. 中国病理生理杂志. 2015(09)
[3]人脑胶质瘤中CENP-W/B23调控Ras信号通路的相关性[J]. 范阳华,吴淼经,吕世刚,汲乾坤,柴毅,徐斌,叶敏华,祝新根. 中山大学学报(医学科学版). 2015(05)
[4]血管内皮细胞通过Notch信号通路对胶质瘤细胞侵袭性生长的影响[J]. 廖长春,周椿昊,肖兵,范阳华,祝新根. 肿瘤防治研究. 2015(07)
[5]人脑胶质瘤中RSUME的SUMO化与HIF-1α/VEGF通路的相关性[J]. 范阳华,叶敏华,吴雷,何伟,廖长春,汲乾坤,祝新根. 西安交通大学学报(医学版). 2015(04)
[6]反义抑制miR-106b表达对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响[J]. 叶敏华,张安玲,吴雷,王坤,王广秀,贾志凡,黄强,祝新根. 中华神经外科杂志. 2015 (01)
[7]缺氧诱导因子-1α与着丝粒蛋白W在人胶质瘤组织及细胞中表达的相关性[J]. 廖长春,范阳华,肖兵,吴雷,祝新根. 肿瘤. 2014(11)
[8]人脑胶质瘤中miR-106b25基因簇表达的研究[J]. 叶敏华,张安玲,王坤,吴淼经,黄强,祝新根. 中国肿瘤临床. 2014(05)
本文编号：3263871
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜检测72小时慢病毒载体CHPFshRNA转染后的U87细胞的荧光
pression levels of CHPF protein in U87 cells after transfection with CHPF-shd by Western blot.测 CHPF-shRNA 转染胶质瘤 U87 细胞后检测 CHPF 蛋白的表达水平8 法检测转染 CHPF-shRNA 后 U87 细胞增殖水平改变检测结果显示，U87 细胞中转入 CHPF-shRNA 后，与空白对 组比较，CHPF-shRNA 组细胞的增殖能力明显减弱（P 值均＜ 照组与 NC-shRNA 组相比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）示。结果表明，抑制 CHPF 表达能显著抑制 U87 细胞的增殖。
Fig.6 Flow cytometry showing the cell cycles of U87 cells after transfection of CHPF-shRNA图 6 流式细胞术的检测周期方法检测转染 CHPF-shRNA 后三组细胞周期情况3.7 流式细胞术分析 U87 细胞感染 CHPF-shRNA 后凋亡水平的改变实验结果：空白组的凋亡率为（7.31±2.16）%，NC-shRNA 组为（7.15±1.07）%，CHPF shRNA 组为（13.97±1.70）%。与空白对照组及 NC-shRNA 组相比，CHPFshRNA 组细胞的凋亡率明显升高，差异有统计学意义（P 值均＜ 0.05），如图 7 所示。NC-shRNA 组与空白组比较，差异无显著性。结果表明 CHPF 表达受抑制后明显促进胶质瘤 U87 细胞的凋亡水平。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Over-expression of LRIG1 Suppresses Biological Function of Pituitary Adenoma via Attenuation of PI3K/AKT and Ras/Raf/ERK Pathways In Vivo and In Vitro[J]. 程世奇,范恒怡,徐新,高伟伟,吕世刚,叶敏华,吴淼经,沈晓黎,程祖珏,祝新根,张焱. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[2]慢病毒介导的RWDD3沉默对人胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响[J]. 范阳华,祝新根,吕世刚,吴淼经,柴毅,叶敏华,肖兵,吴雷. 中国病理生理杂志. 2015(09)
[3]人脑胶质瘤中CENP-W/B23调控Ras信号通路的相关性[J]. 范阳华,吴淼经,吕世刚,汲乾坤,柴毅,徐斌,叶敏华,祝新根. 中山大学学报(医学科学版). 2015(05)
[4]血管内皮细胞通过Notch信号通路对胶质瘤细胞侵袭性生长的影响[J]. 廖长春,周椿昊,肖兵,范阳华,祝新根. 肿瘤防治研究. 2015(07)
[5]人脑胶质瘤中RSUME的SUMO化与HIF-1α/VEGF通路的相关性[J]. 范阳华,叶敏华,吴雷,何伟,廖长春,汲乾坤,祝新根. 西安交通大学学报(医学版). 2015(04)
[6]反义抑制miR-106b表达对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响[J]. 叶敏华,张安玲,吴雷,王坤,王广秀,贾志凡,黄强,祝新根. 中华神经外科杂志. 2015 (01)
[7]缺氧诱导因子-1α与着丝粒蛋白W在人胶质瘤组织及细胞中表达的相关性[J]. 廖长春,范阳华,肖兵,吴雷,祝新根. 肿瘤. 2014(11)
[8]人脑胶质瘤中miR-106b25基因簇表达的研究[J]. 叶敏华,张安玲,王坤,吴淼经,黄强,祝新根. 中国肿瘤临床. 2014(05)
本文编号：3263871
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