整合素CD11b介导视网膜小胶质细胞激活M1/M2表型转化在视神经损伤修复中的作用和机制研究
发布时间：2021-07-06 13:42
研究背景多年以来,国内外促进中枢神经修复的方法主要集中在调控中枢微环境中的神经生长因子、抑制因子[2]和增加神经元内在生长潜能[3]等方面,尤其是联合运用可实现一定程度的再生和功能恢复[4,5],但效果仍不满意。近年来研究发现,中枢神经疾病或损伤会触发多种修复过程,包括神经发生、轴突萌芽、突触发生、血管生成、轴突再生和再髓鞘化等[6],这其中小胶质细胞发挥了十分关键的作用[7]。目前,调控小胶质细胞介导的神经炎症,已逐渐成为中枢神经损伤修复新的研究方向。一、中枢神经炎症在神经损伤后发挥促进继发损伤（M1）和促进再生修复（M2）的双重作用,促进小胶质细胞向M2型极化,可减少炎症继发性损伤和促进神经修复。近年研究发现,中枢神经疾病或损伤过程中小胶质细胞激活会产生两种表型—M1型和M2型。M1型也叫经典激活,主要发挥促炎作用。M1型细胞主要通过释放蛋白酶和活性氧等机制执行宿主抵抗病原体的功能,也能损害健康的神经元;M2型也叫替代激活,主要发挥抗炎作用,M2型细胞具有神经保护、减轻炎症...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CD11b蛋白和Iba1蛋白在正常和视神经损伤后视网膜的表达Fig1-1ExpressionofCD11bandIba1proteininretinaofintactandfollowingopticnervecrush
陆军军医大学博士学位论文27图1-2CD11b蛋白和Iba1蛋白在正常和视神经损伤后视神经的表达Fig1-2ExpressionofCD11bandIba1proteininintactandinjuredopticnerve图1-2说明:免疫荧光双重标记法检测CD11b蛋白和Iba1蛋白在完整静息状态下和视神经损伤后7天视神经的表达的代表性图像。a在静息状态的完整视神经中，CD11b蛋白表达阳性信号几乎不可见。bIba1+小胶质细胞体型纤细呈长梭形，沿视神经长轴均匀分布，与神经纤维走行基本一致。c,hDAPI染核，显示视神经损伤后视神经总细胞数量明显增多。dabc的合并图像。e图像d中盒状区域的高倍放大图，显示Iba1+小胶质细胞胞体细小呈长梭形，沿视神经长轴均匀分布，与神经纤维走行基本一致（细箭头所示）。f视神经损伤后7天视神经CD11b+细胞明显增多。gIba1+小胶质细胞明显增多，胞体增大呈阿米巴样，在视神经中分布排列紊乱。ifgh的合并图像，显示绝大部分CD11b+细胞与Iba1+细胞共染色。j图像i中盒状区域的高倍放大图，显示大部分CD11b+Iba1+小胶质细胞呈阿米巴样，胞体明显变大，分支变粗变短，少数细胞表现为肥大的“变形虫样”吞噬细胞（粗箭头所示）。标尺：a,b,c,d,f,g,h,i=30μm;e,j=10μm。二、WesternBlot实验(一)视神经损伤后视网膜CD11b蛋白表达变化在总蛋白上样量均为40μg、内参照β-actin条带亮度基本相同的前提下，视神经损伤后7天(7dpc),14天(14dpc),28天(28dpc)组视网膜组织中均检测到分布于170KDa左右明显条带，而正常对照(sham)组视网膜组织中条带非常微弱。各组内参β-actin蛋白条带均分布于43KDa左右。Image-ProPlus5.0图像处理软件分析结果表明：CD11b蛋白在正常静息状态下的视网膜中表达量很低，视神经损伤后7天,14天,28天组CD11b蛋白表达均显著高于正常对照组(*p<0.01,n=6)；视神?
陆军军医大学博士学位论文28但14天组较28天组比较差异无统计学意义（图1-3）。图1-3WesternBlot检测正常和视神经损伤后视网膜CD11b蛋白的表达Fig1-3DetectionofCD11bproteininretinaofintactandfollowingopticnervecrushbyWesternBlot图1-3说明:CD11b蛋白在正常静息状态下的视网膜中低表达，视神经损伤后视网膜CD11b蛋白表达量明显升高，伤后7天达最高峰，伤后14天较7天表达明显下降，至伤后28天仍维持在较高水平。*p<0.01，n=6。(二)视神经损伤后视神经CD11b蛋白表达变化在总蛋白上样量均为40μg、内参照β-actin条带亮度基本相同的前提下，视神经损伤后7天,14天,28天组视神经组织中均检测到分布于170KDa左右明显条带，而正常对照组视神经组织中几乎无信号。各组内参β-actin蛋白条带均分布于43KDa左右。Image-ProPlus5.0图像处理软件分析结果表明：CD11b蛋白在正常对照组视神经中几乎无表达，视神经损伤后7天,14天,28天组CD11b蛋白表达均显著高于正常对照组(*p<0.01,n=6)；视神经损伤后7天CD11b蛋白表达达最高峰，14天组较7天组CD11b蛋白表达量明显下降(*p<0.01,n=6)，但14天组较28天组比较差异无统计学意义（图1-4）。
本文编号：3268349
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CD11b蛋白和Iba1蛋白在正常和视神经损伤后视网膜的表达Fig1-1ExpressionofCD11bandIba1proteininretinaofintactandfollowingopticnervecrush
陆军军医大学博士学位论文27图1-2CD11b蛋白和Iba1蛋白在正常和视神经损伤后视神经的表达Fig1-2ExpressionofCD11bandIba1proteininintactandinjuredopticnerve图1-2说明:免疫荧光双重标记法检测CD11b蛋白和Iba1蛋白在完整静息状态下和视神经损伤后7天视神经的表达的代表性图像。a在静息状态的完整视神经中，CD11b蛋白表达阳性信号几乎不可见。bIba1+小胶质细胞体型纤细呈长梭形，沿视神经长轴均匀分布，与神经纤维走行基本一致。c,hDAPI染核，显示视神经损伤后视神经总细胞数量明显增多。dabc的合并图像。e图像d中盒状区域的高倍放大图，显示Iba1+小胶质细胞胞体细小呈长梭形，沿视神经长轴均匀分布，与神经纤维走行基本一致（细箭头所示）。f视神经损伤后7天视神经CD11b+细胞明显增多。gIba1+小胶质细胞明显增多，胞体增大呈阿米巴样，在视神经中分布排列紊乱。ifgh的合并图像，显示绝大部分CD11b+细胞与Iba1+细胞共染色。j图像i中盒状区域的高倍放大图，显示大部分CD11b+Iba1+小胶质细胞呈阿米巴样，胞体明显变大，分支变粗变短，少数细胞表现为肥大的“变形虫样”吞噬细胞（粗箭头所示）。标尺：a,b,c,d,f,g,h,i=30μm;e,j=10μm。二、WesternBlot实验(一)视神经损伤后视网膜CD11b蛋白表达变化在总蛋白上样量均为40μg、内参照β-actin条带亮度基本相同的前提下，视神经损伤后7天(7dpc),14天(14dpc),28天(28dpc)组视网膜组织中均检测到分布于170KDa左右明显条带，而正常对照(sham)组视网膜组织中条带非常微弱。各组内参β-actin蛋白条带均分布于43KDa左右。Image-ProPlus5.0图像处理软件分析结果表明：CD11b蛋白在正常静息状态下的视网膜中表达量很低，视神经损伤后7天,14天,28天组CD11b蛋白表达均显著高于正常对照组(*p<0.01,n=6)；视神?
陆军军医大学博士学位论文28但14天组较28天组比较差异无统计学意义（图1-3）。图1-3WesternBlot检测正常和视神经损伤后视网膜CD11b蛋白的表达Fig1-3DetectionofCD11bproteininretinaofintactandfollowingopticnervecrushbyWesternBlot图1-3说明:CD11b蛋白在正常静息状态下的视网膜中低表达，视神经损伤后视网膜CD11b蛋白表达量明显升高，伤后7天达最高峰，伤后14天较7天表达明显下降，至伤后28天仍维持在较高水平。*p<0.01，n=6。(二)视神经损伤后视神经CD11b蛋白表达变化在总蛋白上样量均为40μg、内参照β-actin条带亮度基本相同的前提下，视神经损伤后7天,14天,28天组视神经组织中均检测到分布于170KDa左右明显条带，而正常对照组视神经组织中几乎无信号。各组内参β-actin蛋白条带均分布于43KDa左右。Image-ProPlus5.0图像处理软件分析结果表明：CD11b蛋白在正常对照组视神经中几乎无表达，视神经损伤后7天,14天,28天组CD11b蛋白表达均显著高于正常对照组(*p<0.01,n=6)；视神经损伤后7天CD11b蛋白表达达最高峰，14天组较7天组CD11b蛋白表达量明显下降(*p<0.01,n=6)，但14天组较28天组比较差异无统计学意义（图1-4）。
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