雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究

发布时间：2021-07-10 23:01

　　目的：胶质瘤是最常见的原发性脑部肿瘤,且多数切除后有复发可能。目前,针对恶性肿瘤细胞增殖、凋亡等方面的研究十分普遍。临床上使用的抗肿瘤药物大都是通过抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞的凋亡来发挥作用的。PI3K/Akt/mTOR信号通路在多种恶性肿瘤中过度激活,调控恶性肿瘤的发生和发展。mTOR是PI3K/Akt信号通路下游重要的激酶,参与调控包括神经胶质瘤在内的多种肿瘤细胞的生存和增殖。雷帕霉素是mTOR的抑制剂,能通过抑制mTOR的活性,参与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路在恶性肿瘤细胞中的作用。然而,关于雷帕霉素治疗神经胶质瘤的作用及相关分子机制尚未研究清楚。在恶性肿瘤细胞中,糖酵解水平异常升高,多种糖酵解酶的表达和活性被过度激活,提示糖酵解途径可能为抗癌治疗提供丰富的靶点。最近有研究报道,microRNA-143受mTOR通路调控,且在多种恶性肿瘤中表达异常下调,其靶基因包括糖酵解关键限速酶己糖激酶2（HK2）。然而,关于mTOR通路、miRNA-143以及糖酵解途径在神经胶质瘤中的调控作用及三者之间的关系尚不清楚。本研究利用人神经胶质瘤细胞系U251和CHG-5,探索雷帕... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
中英文缩略词
技术路线图
引言
第一章 雷帕霉素对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
    前言
    1、材料与方法
        1.1 细胞系
        1.2 实验仪器及实验试剂
            1.2.1 主要实验仪器与耗材
            1.2.2 主要实验试剂
    2. 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞处理
        2.3 MTT检测
        2.4 Annexin V-FITC&PI凋亡检测
        2.5 蛋白样品的制备与浓度测定
        2.6 Western Blot检测
        2.7 统计分析
    3. 实验结果
        3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞增殖的影响
        3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞凋亡的影响
        3.3 Western Blot检测Rapamycin对人胶质瘤U251和CHG-5细胞中mTOR活性的影响
    4. 讨论
第二章 雷帕霉素通过下调糖酵解水平抑制神经胶质瘤的增殖
    前言
    一、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解水平的影响
        1、材料
            1.1 细胞系
                1.1.1 主要实验仪器与耗材
                1.1.2 主要实验试剂
        2、实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 细胞处理
            2.3 葡萄糖摄取检测
            2.4 乳酸分泌检测,见上海研瑾生物科技人乳酸试剂盒说明书
            2.5 统计分析
        3、实验结果
            3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞葡糖糖摄取的影响
                3.1.1 雷帕霉素对U251细胞葡糖糖摄取的影响
                3.1.2 雷帕霉素对CHG-5细胞葡糖糖摄取能力的影响
            3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸分泌的影响
                3.2.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸分泌的影响
                3.2.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸分泌的影响
        4、讨论
    二、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解酶的表达及活性的影响
        1. 材料
            1.1 细胞系
                1.1.1 主要实验仪器与耗材
                1.1.2 主要实验试剂
        2、实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 细胞处理
            2.3 Western Blotting
            2.4 己糖激酶活性检测
            2.5 丙酮酸激酶活性检测
            2.6 乳酸脱氢酶活性检测
            2.7 统计分析
        3 实验结果
            3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶活性的影响
                3.1.1 雷帕霉素对U251细胞己糖激酶活性的影响
                3.1.2 雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶活性的影响
            3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶活性的影响
                3.2.1 雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶活性的影响
                3.2.2 雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶活性的影响
            3.3 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响
                3.3.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶活性的影响
                3.3.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶活性的影响
            3.4 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶蛋白表达的影响
                3.4.1 雷帕霉素对U251细胞己糖激酶蛋白表达的影响
                3.4.2 雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶蛋白表达的影响
            3.5 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
                3.5.1 雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
                3.5.2 雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
            3.6 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
                3.6.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
                3.6.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
        4、讨论
    三、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞miR-143表达的影响
        1、材料
            1.1 细胞系
            1.2 主要实验仪器与耗材
            1.3 主要实验试剂
        2、实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 引物设计
            2.3 细胞处理
            2.4 总RNA抽提
            2.5 基因组DNA的去除
            2.6 miRNA-PolyA标记与RT反应
            2.7 miRNA-定量PCR检测
            2.8 统计分析
        3、实验结果
            3.1 雷帕霉素对U251细胞中miR-143表达的影响
            3.2 雷帕霉素对CHG-5细胞中miR-143表达的影响
        4、讨论
结论
本研究创新点
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间主要的研究成果



本文编号：3276812