复方TRAIL/DOX脂质体用于脑胶质瘤的治疗研究

发布时间：2021-07-18 08:38

　　据统计,脑胶质瘤约占脑部肿瘤的30～40%,而传统的手术治疗、放疗或化疗并不能取得理想的治疗效果,因此,探寻新的治疗方法成为脑胶质瘤的研究重点。细胞凋亡在胚胎发育与组织分化中起着关键作用,细胞凋亡失调对肿瘤的发生、发展甚为重要,其存在细胞内与细胞外两条途径。化疗药物盐酸阿霉素（Doxorubicin, DOX）通过细胞内途径促进肿瘤细胞凋亡；而肿瘤坏死因子家族成员TRAIL （TNF-related apoptosis-inducing ligand）主要通过细胞外途径促进肿瘤细胞凋亡。本课题以DOX与TRAIL为治疗药物,采用长循环脂质体作为药物载体,制备复方脂质体（TRAIL-LP/DOX-LP）,以期同时通过细胞内途径与细胞外途径,发挥两种药物的协同抗肿瘤作用,延长药物的体内滞留时间,并利用肿瘤的EPR效应增加药物在肿瘤部位的蓄积,促进肿瘤细胞的凋亡,增强抗肿瘤效果。本文第一章为复方TRAIL/DOX溶液剂的协同抗肿瘤作用研究。以对TRAIL不敏感的人脑胶质瘤细胞U87为研究对象,考察了TRAIL与DOX合用的协同增效作用,并对其体内抗U87脑胶质瘤的药效学进行了初步探索。结果表... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 TRAIL与阿霉素的协同抗肿瘤作用研究
    第一节 TRAIL与阿霉素合用增强对肿瘤细胞的杀伤作用
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 细胞毒研究
            2.3 细胞凋亡检测
            2.4 细胞周期检测
        3 实验结果
            3.1 单用TRAIL对肿瘤细胞的细胞毒作用
            3.2 TRAIL与阿霉素合用对U87细胞的杀伤作用
                3.2.1 细胞毒作用
                3.2.2 治疗指数(therapeutic index,TI)的评价
            3.3 TRAIL与阿霉素合用对A-549细胞的杀伤作用
                3.3.1 细胞毒作用
                3.3.2 细胞凋亡检测
                3.3.3 细胞周期检测
    第二节 TRAIL与阿霉素合用的体内药效学评价
        1 仪器和材料
        2 实验方法
            2.1 TRAIL与阿霉素合用对原位脑胶质瘤模型的疗效评价
                2.1.1 U87原位脑胶质瘤模型建立方法的研究
                2.1.2 模型的验证
                2.1.3 实验分组及治疗方案
            2.2 TRAIL与阿霉素合用对肺癌皮下瘤模型的疗效评价
        3 实验结果
            3.1 原位脑胶质瘤模型的药效学评价
                3.1.1 原位脑胶质瘤模型的验证
                3.1.2 原位脑胶质瘤模型的药学评价
            3.2 肺癌皮下瘤模型的药效学评价
        4 讨论
            4.1 肿瘤细胞对TRAIL的耐药机制
            4.2 关于脑胶质瘤模型的建立
            4.3 阿霉素溶液剂对肺癌皮下瘤的体内药效
            4.4 TRAIL与化疗药物合用治疗肿瘤的研究进展
    本章小结
第二章 TRAIL-LP/DOX-LP的制备及其脑胶质瘤的被动靶向特性考察
    第一节 TRAIL-LP/DOX-LP的制备与表征
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
        2 实验方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 DOX-LP的制备
            2.3 DOX-LP的包封率与释放度测定
                2.3.1 DOX-LP的包封率测定
                2.3.2 DOX-LP的释放度测定
            2.4 TRAIL-LP的制备
            2.5 TRAIL-LP的包封率与释放度测定
                2.5.1 洗脱曲线的制备
                2.5.2 TRAIL-LP的包封率测定
                2.5.3 TRAIL-LP的释放度测定
            2.6 DOX-LP与TRAIL-LP的粒径、Zeta电位的测定
            2.7 DOX-LP与TRAIL-LP的稳定性考察
        3 实验结果
            3.1 脂质体的表征
                3.1.1 脂质体的包封率、粒径等考察
                3.1.2 透射电镜鉴定
            3.2 脂质体的释放度
            3.3 脂质体的稳定性
    第二节 脂质体的脑胶质瘤被动靶向特性考察
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
            1.3 实验动物
        2 实验方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 细胞培养
            2.3 荷原位脑胶质瘤动物模型的构建
            2.4 DiR-LP的制备
            2.5 脂质体的脑胶质瘤靶向特性考察
        3 实验结果
        4 讨论
            4.1 复方脂质体的制备方法
            4.2 脂质体粒径大小的控制
            4.3 延长TRAIL体内滞留时间的方法
            4.4 小动物活体成像技术
            4.5 脂质体在肝肾的蓄积
    本章小结
第三章 TRAIL-LP/DOX-LP治疗U87脑胶质瘤的药效学及安全性评价
    第一节 TRAIL-LP/DOX-LP治疗U87脑胶质瘤的体内外药效学研究
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
            1.3 实验动物
        2 实验方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP的体外细胞杀伤作用研究
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的体内药效学评价
                2.2.1 组织水平的病理解剖学评价
                2.2.2 流式细胞仪PI染色检测凋亡率
                2.2.3 荷瘤鼠生存期评价
                2.2.4 Actived caspase-3表达量的检测
        3 实验结果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP对体外U87细胞的凋亡作用及抑制率
            3.2 体内药效学评价
                3.2.1 组织水平的病理解剖学评价
                3.2.2 流式细胞仪PI染色检测凋亡率
                3.2.3 荷瘤鼠的生存期评价
                3.2.4 蛋白水平免疫荧光检测actived caspase-3的表达
    第二节 TRAIL-LP/DOX-LP治疗U87脑胶质瘤的体内外安全性评价
        1 仪器和材料
        2 实验方法
            2.1 TRAIL-LP/DOX-LP对正常细胞的抑制率及细胞凋亡考察
            2.2 TRAIL-LP/DOX-LP的体内安全性评价
        3 实验结果
            3.1 TRAIL-LP/DOX-LP对正常细胞的细胞毒作用评价
            3.2 TRAIL-LP/DOX-LP体内安全性的初步评价
        4 讨论
            4.1 关于肿瘤大小的评价
            4.2 TRAIL-LP/DOX-LP治疗脑胶质瘤的体内药效学评价
            4.3 TRAIL对正常组织的毒性
    本章小结
第四章 TRAIL-LP/DOX-LP协同抗脑胶质瘤的机理研究
    第一节 TRAIL-LP/DOX-LP协同抗脑胶质瘤机理的体外研究
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
        2 实验方法
            2.1 U87细胞的培养
            2.2 U87细胞内死亡受体表达的测定
            2.3 U87细胞内caspase家族及Bcl-2家族表达的测定
            2.4 U87细胞表面DR4和DR5表达的测定
            2.5 受体阻断对TRAIL-LP/DOX-LP诱导细胞凋亡的影响测定
        3 实验结果
            3.1 DOX-LP对U87细胞内死亡受体表达的影响
            3.2 DOX-LP对U87细胞表面死亡受体表达的影响
            3.3 U87细胞死亡受体阻断实验
            3.4 TRAIL-LP/DOX-LP对U87细胞内caspase表达的影响
            3.5 TRAIL-LP/DOX-LP对U87细胞内Bcl家族蛋白表达的影响
    第二节 TRAIL-LP/DOX-LP协同抗脑胶质瘤机理的体内研究
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
            1.3 实验动物
        2 实验方法
            2.1 U87原位脑胶质瘤模型的建立
            2.2 实验分组与治疗方案
            2.3 蛋白水平免疫荧光检测DR4与DR5的表达量
        3 实验结果
            3.1 荷瘤鼠给药后体内DR5的表达
            3.2 荷瘤鼠给药后体内DR4的表达
        4 讨论
            4.1 DR4与DR5在TRAIL诱导的凋亡中的作用
            4.2 关于体外机理研究的细胞模型选取
    本章小结
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
中英文对照表
致谢
在校期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Caspase家族与细胞凋亡[J]. 岳原亦,张扬,张一奇.  中国医疗前沿. 2011(06)
[2]肿瘤坏死因子诱导凋亡配体TRAIL研究进展[J]. 范开,罗岚,刘洪洪.  重庆理工大学学报(自然科学版). 2011(02)
[3]小动物活体成像技术研究进展[J]. 李冬梅,万春丽,李继承.  中国生物医学工程学报. 2009(06)
[4]肿瘤疗效评价研究进展[J]. 程志祥,王科明.  中国肿瘤. 2009(07)
[5]活体动物体内成像技术及其在生物医学中的应用进展[J]. 周涛,韩彧,巩伟丽,赵春林.  中国体视学与图像分析. 2007(01)
[6]重组人凋亡素2配体治疗晚期恶性肿瘤Ⅰ期临床耐受性研究[J]. 周生余,陈闪闪,刘鹏,罗扬,邢镨元,何静,石远凯,冯奉仪.  中国新药杂志. 2007(01)
[7]顺铂和阿霉素对K562细胞周期及凋亡影响的研究[J]. 黄伟,张瑶珍,周剑锋,刘文励.  中国病理生理杂志. 2005(03)
[8]Following a TRAIL: Update on a ligand and its five receptors[J]. Fiona C. KIMBERLEY,Gavin R. SCREATON.  Cell Research. 2004(05)

博士论文
[1]抑制p53与MDM2结合的抗肿瘤多肽设计与靶向递送[D]. 李翀.复旦大学 2010
[2]功能性Pluronic P123/F127混合胶束用于治疗多药耐药肿瘤的研究[D]. 张伟.复旦大学 2010



本文编号：3289234