肿瘤相关基因启动子甲基化和人脑胶质瘤临床预后相关性研究

发布时间：2021-07-22 00:23

　　神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,如何进一步了解肿瘤发病的机理,为治疗脑胶质瘤探索新的思路和方法,以改善脑胶质瘤患者的生存率及生存质量,这一直是医学面临的难题。表观遗传学指研究不引起基因序列改变,但可以影响基因表达的可遗传性改变,其中DNA甲基化是人类最为常见的表观遗传改变,胶质瘤中也存在不同形式的异常甲基化,包括全基因组低甲基化,启动子CpG岛高甲基化,这些改变可能导致癌基因的活化和/或抑癌基因的表达沉默而最终形成肿瘤。本课题旨在研究与神经胶质瘤相关的部分肿瘤基因启动子区甲基化状态与肿瘤患者临床预后的相关性以及对甲基化状态检测方法的探究,以期找到一种适合于临床应用的检测方法,对脑胶质瘤早期诊断、复发监测、预后评判、个体化治疗方案的选择以及进一步行分子生物学治疗提供理论依据。第一部分人脑胶质瘤MGMT启动子甲基化检测方法的研究实验目的巢式MSP是目前研究MGMT启动子甲基化的方法中比较成熟的种,并已用巢式MSP法建立了MGMT启动子甲基化状态的预测价值。本实验中,我们用一种灵敏且高通量的实时荧光定量的方法（MethyLight）来检测胶质瘤MGMT启动子甲基化状态,对比分... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

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ACTB和MGMT标准曲线及有效性分析

^ .丨“ ,“ j ~actb“ 1 <~ MGMTJ I 1 i 3 4 S S 7 ILeg CORe<dy OMOKIMM图3 ： ACTB和MGMT标准曲线及有效性分析如图4A所示，巢式MSP检测方法中，电泳结果中出现未甲基化条带（U)，而没有出现甲基化条带（M),则判定该样本未发生甲基化；电泳结果中出现M条带或者M和U条带均出现，则判断该样本发生甲基化。如图4B所示，实时定量MethyLight检测方法中，有扩增曲线，引物经过验证未出现二聚体，且经SDS1.2分析软件得到的Ct值低于40的，我们认为该实验数据有效，然后进行分析判定对应的样本是否发生甲基化。

图2 WKaplan-Meier曲线表示CD133启动子甲基化状态与患者PFS和OS之间的相关性。A：用原始的CD133启动+甲基化状态分类法得到的Kaplan-Meier曲线；B：用调整后的CD133启动子甲基化状态分类法得到的Ka plan-Meier曲线。多变量分析证实，CD133未甲基化是独立于WHO分级，年龄和手术切除范围因素之外导致患者OS较短的预后因素（HR, 2.87； 95%可信区间为1.74-4.73;P <0.001)；对于PFS较短的患者来说，同样也存在CD133未甲基化（HR，2.61；95%可信区间为 1.57-4.34; P <0.001)(见表2)。表2:多因素分析显示CD133启动子甲基化状态、年龄、手术切除范围勾患者PFS及OS的相 ^ PFS (n=152) OS (n=170)变量 HR (95% CI) P HR (95% CI) PCD133 M+, U-/1 1 1甲基化 M+, U+ 1.11 (0.58-2.11) 0.751 1.58 (0.86-2.88) 0.140


本文编号：3296062