miR-1247-3p靶向caspase-2蛋白对脑缺血再灌注诱导的神经细胞凋亡的影响
发布时间：2021-07-26 19:21
目的探讨miR-1247-3p对脑缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IS/R）中脑神经细胞凋亡的影响,并阐明miR-1247-3p调控神经细胞凋亡的上下游分子机制。方法建立小鼠大脑中动脉阻塞模型（cerebral middle artery occlusion,MCAO）缺血1 h/再灌注0 h、6 h、12 h、24 h及N2a细胞氧糖剥夺3 h/复氧复糖（oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）0 h、6 h、12 h、24 h损伤模型,观察miR-1247-3p表达的变化;在此基础上,侧脑室注射LV-miR-1247-3p慢病毒7天以及转染25 nM miR-1247-3p mimic 48 h,观察过表达miR-1247-3p后,对神经细胞凋亡的影响。并用20?M Caspase-2抑制剂Z-VDVAD-FMK处理N2a细胞,观察其机制是否与调控caspase-2表达有关;在此基础上,转染MRTF-A过表达质粒至N2a细胞,观察过表达MRTF-A对miR-1247-3p调控神经细胞凋亡的...
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-1247-3p在脑缺血再灌注损伤体内模型小鼠脑组织中的表达
+P < 0.05,++P < 0.01 vs. LV-NEG + IS 1 h/R 24 h.3.3 过表达 miR-1247-3p 可以减轻脑缺血再灌注损伤中的神经元凋亡为了验证过表达 miR-1247-3p 对脑缺血再灌注诱导的脑神经细胞凋亡的影响，我们通过 TUNEL 染色和 cleaved caspase-3 蛋白水平来判断细胞凋亡情况。结果表明，与 sham 组相比，IS 1 h/R 24 h 组的小鼠脑组织皮层 TUNEL 阳性率显著升高（41.4 3.8% ，P < 0.001，Fig. 3A, B），cleaved caspase-3 蛋白水平显著上调（1.9 0.2 ，P < 0.001，Fig. 3C）。过表达 miR-1247-3p 后，与 LV-NEG +IS 1 h/R 24 h 组相比，LV-miR-1247-3p + IS 1 h/R 24 h 组小鼠皮层 TUNEL 阳性细胞减少（19.1 2.4 %，P < 0.001，Fig. 3A, B），cleaved caspase-3 水平下降（1.1 0.1 ，P < 0.05，Fig. 3C），且差异具有统计学意义。以上结果表明，过表达miR-1247-3p 能减轻脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡。
图 4 miR-1247-3p 在体外 OGD/R 模型中的表达以及 N2a 细胞凋亡。在 OGD/R模型之前 48 h，N2a 细胞转染 miR-1247-3p mimic 和 NEG mimic。（A）miR-1247-3p 在不同再灌注时间点的表达。（B）RT-PCR 检测 N2a 细胞转染miR-1247-3p mimic 之后 miR-1247-3p 的表达。（C）TUNEL 染色代表性图片检测细胞凋亡发生情况。（D）细胞凋亡发生率百分比。（E）western blotting 检测cleaved caspase-3 蛋白水平。所有的值均采用平均值 SEM（n = 4）。*P < 0.05, **P< 0.01 和***P < 0.001 与 ctrl 组相比；**P < 0.01 和***P < 0.001 与 NEG-mimic组相比；++P < 0.01 和+++P < 0.001 与 NEG mimic+OGD 3 h/R 24 h 组相比。Fig. 4 miR-1247-3p expression in vitro and N2a apoptosis. N2a cells weretransfected with a miR-1247-3p mimic or NEG mimic prior to OGD/R treatment. (A)Expression of miR-1247-3p at different reperfusion times. (B) miR-1247-3pexpression levels detected by RT-PCR. (C) Representative images and statistics ofTUNEL staining of N2a cells used to confirm apoptotic changes (100 ). (D) Cleavedcaspase-3 protein levels measured by western blotting. Values are mean ±SEM (n =4 in each group).*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs. ctrl; **P < 0.01, ***P <
本文编号：3304199
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-1247-3p在脑缺血再灌注损伤体内模型小鼠脑组织中的表达
+P < 0.05,++P < 0.01 vs. LV-NEG + IS 1 h/R 24 h.3.3 过表达 miR-1247-3p 可以减轻脑缺血再灌注损伤中的神经元凋亡为了验证过表达 miR-1247-3p 对脑缺血再灌注诱导的脑神经细胞凋亡的影响，我们通过 TUNEL 染色和 cleaved caspase-3 蛋白水平来判断细胞凋亡情况。结果表明，与 sham 组相比，IS 1 h/R 24 h 组的小鼠脑组织皮层 TUNEL 阳性率显著升高（41.4 3.8% ，P < 0.001，Fig. 3A, B），cleaved caspase-3 蛋白水平显著上调（1.9 0.2 ，P < 0.001，Fig. 3C）。过表达 miR-1247-3p 后，与 LV-NEG +IS 1 h/R 24 h 组相比，LV-miR-1247-3p + IS 1 h/R 24 h 组小鼠皮层 TUNEL 阳性细胞减少（19.1 2.4 %，P < 0.001，Fig. 3A, B），cleaved caspase-3 水平下降（1.1 0.1 ，P < 0.05，Fig. 3C），且差异具有统计学意义。以上结果表明，过表达miR-1247-3p 能减轻脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡。
图 4 miR-1247-3p 在体外 OGD/R 模型中的表达以及 N2a 细胞凋亡。在 OGD/R模型之前 48 h，N2a 细胞转染 miR-1247-3p mimic 和 NEG mimic。（A）miR-1247-3p 在不同再灌注时间点的表达。（B）RT-PCR 检测 N2a 细胞转染miR-1247-3p mimic 之后 miR-1247-3p 的表达。（C）TUNEL 染色代表性图片检测细胞凋亡发生情况。（D）细胞凋亡发生率百分比。（E）western blotting 检测cleaved caspase-3 蛋白水平。所有的值均采用平均值 SEM（n = 4）。*P < 0.05, **P< 0.01 和***P < 0.001 与 ctrl 组相比；**P < 0.01 和***P < 0.001 与 NEG-mimic组相比；++P < 0.01 和+++P < 0.001 与 NEG mimic+OGD 3 h/R 24 h 组相比。Fig. 4 miR-1247-3p expression in vitro and N2a apoptosis. N2a cells weretransfected with a miR-1247-3p mimic or NEG mimic prior to OGD/R treatment. (A)Expression of miR-1247-3p at different reperfusion times. (B) miR-1247-3pexpression levels detected by RT-PCR. (C) Representative images and statistics ofTUNEL staining of N2a cells used to confirm apoptotic changes (100 ). (D) Cleavedcaspase-3 protein levels measured by western blotting. Values are mean ±SEM (n =4 in each group).*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs. ctrl; **P < 0.01, ***P <
本文编号：3304199
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