脑内嗅鞘细胞移植对mSOD1G93AALS大鼠治疗作用的研究

发布时间：2021-07-30 22:15

　　目的观察荧光大鼠嗅球来源的嗅鞘细胞经颅移植到放射冠后对mSOD1G93A转基因ALS大鼠的发病时间、生存率、行为学等方面的影响，探讨嗅鞘细胞经颅移植到放射冠对mSOD1G93A转基因ALS大鼠的治疗作用及相关机制，为临床ALS治疗提供相关的实验学证据。方法1mSOD1G93A转基因大鼠的筛选鉴定出生21天的仔鼠剪鼠尾适量，DNA提取后PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像系统下观察。2嗅鞘细胞培养新生1周的SD大鼠，荧光显微镜下观察，筛选出荧光表现阳性的大鼠备用，先用碘伏消毒其全身，尤其是头颈部，再用酒精喷洒脱碘后拿到超净工作台内，用消毒剪沿颈部剪下，换剪刀后沿头顶正中线剪开皮肤和颅骨，取出双侧嗅球，放于冰块上的DF-12内，清洗三遍，解剖镜下剥膜，头部难剥离部分可适当保留，用眼科剪剪成1立方毫米大小的组织块，将剪碎的组织块移入15ml离心管，用弯头吸管来回轻轻吹打，制成细胞悬液，胰蛋白酶消化后收集细胞，以13%的血清培养基制成细胞悬液平均铺入经多聚赖氨酸包板后的细胞培养板中，在CO2培养箱中培养。3嗅鞘细胞鉴定包括形态学鉴定和免疫荧光染色鉴定，形态学鉴定可在倒置显微镜下观察... 

【文章来源】：泰山医学院山东省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验步骤简图：大鼠出生后90天进行嗅鞘细胞放射冠移植，发

图 2 mSOD1G93A 基因表达的 PCR 鉴定结果M为Marker ；1、5、6、8 为mSOD1G93A转基因阳性鼠；2、3、4、7、9 为mSOD1G93A转基因阴性鼠。Fig.2.Identification of mutant SOD1G93A transgenic through PCM is the Marker; 1、5、6、8 are positive expression mo2、3、4、7、9 are negative expression mouse.细胞的培养材 天的 SD 大鼠，荧光显微镜下进行筛选，选择表达用镊子夹取浸泡于碘伏内的棉球擦拭鼠头及鼠身和鼠颈部，彻底消毒，再用酒精棉球擦拭或用装

结 果1 嗅鞘细胞移植前的鉴定及移植后的存活和迁移细胞培养后定期在显微镜下进行观察和鉴定，主要看细胞的形态和生长状态，培养三天后观察可见细胞以梭形和多突起细胞为主,细胞立体感强、透亮、杂质细胞较少（图 3，A）。在二氧化碳培养箱中培养 7 天后进行GFP绿色荧光标记的细胞的免疫组化染色（图 3，B）及其所表达的P75 蛋白的情况（图 3，C）。高倍共聚焦显微镜下观察P75 阳性细胞（图 3 D和E，F）的比例。

【参考文献】：
期刊论文
[1]肌电图评价肌萎缩侧索硬化389例嗅鞘细胞脑内移植的效果[J]. 陈琳,黄红云,江昭,王援朝,王庆苗,郗海涛,包建玲,王洪美.  中国组织工程研究与临床康复. 2008(43)
[2]干细胞治疗肌萎缩侧索硬化的研究进展[J]. 邓敏,樊东升.  中国实用内科杂志. 2007(10)
[3]腺病毒介导的血管内皮生长因子基因转移对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用[J]. 田有勇,孙圣刚,王家宁,汤翠菊,冯媛,王岚,陈小武,乔娴.  中华医学杂志. 2006(29)
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本文编号：3312222