miR-34b/miR-23a靶向Keap1/ULK1调控脑缺血再灌注氧化损伤的机制研究

发布时间：2021-08-03 10:48

　　目的:探讨miR-34b/miR-23a靶向Keap1/ULK1调控大鼠脑缺血再灌注氧化应激反应的分子机制。方法:（1）应用QPCR技术检测I/R大鼠脑梗死核心组织中miR-34b/miR-23a的表达水平;通过慢病毒技术在MCAO大鼠脑组织中过表达miR-34b/miR-23a,再灌注后Berdron评分与TTC染色检测大鼠的神经损伤和脑梗死体积,化学比色法测定总SOD、NO和MnSOD含量,ELISA检测3-NT含量;（2）借助QPCR和Western blot技术检测I/R大鼠脑梗死核心组织中Keap1/ULK1的表达情况,检测miR-34b/miR-23a对Keap1/ULK1的表达调控,并用双荧光素酶实验验证miR-34b/miR-23a与Keap1-3′-UTR/ULK1-3′-UTR的靶向结合位点;（3）采用H₂O₂诱导细胞氧化损伤,分别上下调Keap1,过表达miR-34b和Keap1,过表达miR-23a和ULK1,再用化学比色法测定总SOD、NO与MnSOD的含量,ELISA检测3-NT的含量。结果:（1）相较于假手术组,... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

脑缺血再灌注对脑组织中miR-34b-3p的表达影响

0.934 0.996 0.198 0.667 1.5241.082 0.938 0.260 0.732 1.458图1-2 脑缺血再灌注对脑组织中miR-23a-5p的表达影响control：对照组；sham：假手术组；1：再灌注1h；4：再灌注4h；24：再灌注24h。Fig.1-2 Relative expression of miR-23a-5p in I/Rcontrol，sham，1：I/R 1h，4：I/R 4h，24：I/R 24h.2.2 miR-34b和miR-23a的慢病毒过表达验证为了研究miR-34b-3p和miR-23a-5p在I/R损伤中的详细功能，我们通过在脑室内分别注射miR-34b-3p和miR-23a-5p过表达慢病毒来实现大鼠组织中的miR-34b-3p和miR-23a-5p的过表达，并通过实时荧光定量PCR进行效果验证。如图1-3为注射miR-34b-3p过表达慢病毒后大鼠组织中miR-34b-3p表达效率检测，结果显示注射miR-34b-3p过表达慢病毒后大鼠组织中miR-34b-3p的表达水平显著高于对照组（P＜0.01）。如图1-4为注射miR-23a-5p过表达慢病毒后大鼠组织中miR-23a-5p表达效率检测

新疆医科大学博士学位论文36图1-3 大鼠脑组织中miR-34b-3p过表达慢病毒效率验证结果Fig.1-3 Validation of the efficiency of miR-34b-3p over-expression lentivirus in rat brain表1-17 大鼠脑组织中miR-23a-3p过表达慢病毒效率Tab 1-17 Validation of the efficiency of miR-23a-3p over-expression lentivirus in rat brainpLVX-NC pLVX-miR-23a1.000 2.2011.050 2.3871.064 2.081图1-4 大鼠脑组织中miR-23a-5p过表达慢病毒效率验证结果Fig.1-4 Validation of the efficiency of miR-23a-5p over-expression lentivirus in rat brain2.3 miR-34b/miR-23a过表达对I/R神经功能评分的影响过表达慢病毒注射后3天，建立MCAO大鼠模型。MCAO大鼠建模苏醒后的大鼠可能会出现一些神经功能损伤的症状。有些大鼠会出现精神差，嗜睡，反应慢，进

【参考文献】：
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本文编号：3319486