自噬对脑出血大鼠脑内NF-κB介导的继发性炎症的影响及3MA干预作用
发布时间：2021-08-07 00:06
目的观察大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型脑组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、Beclin1和核因子-κB（nuclear factor-κappa B,NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）的变化,以探讨自噬对脑出血大鼠脑组织神经元细胞继发性炎症损伤的影响及3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3MA）干预作用,进而探讨抑制自噬对脑出血大鼠的保护作用及可能机制。方法1模型制备及分组:实验采用自体新鲜不抗凝血液注入大鼠右侧大脑基底节区建立ICH模型。成年雄性SD大鼠180只,随机分为如下三组:假手术组（Sham组）;脑出血模型组（ICH模型组）:采用自体新鲜不抗凝血液注入大鼠右侧基底节区制作ICH模型;脑出血模型+抑制剂干预组（ICH+3MA组）:于脑出血造模前15min给予3MA腹腔注射5mg/kg,随后每日注射一次。每组按不同时间点（0.5d、1d、2d、3d、5d）又分为五个...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠脑出血模型制备过程
-13-1.2结果1.2.1脑出血模型及神经行为学检查结果各组大鼠手术前神经行为学均无异常。脑出血大鼠模型制作过程中因麻醉、术后感染等原因死亡11只，死亡大鼠作为缺失值剔除，并在后续试验中补充。手术后，根据Longa评分法[20]，对实验大鼠神经功能进行评定。Sham组大鼠在完全清醒后，无明显神经功能障碍，肢体活动自如，刺激肢体痛觉反应灵敏，神经学检查评分为0分。ICH模型组、ICH+3MA组大鼠完全清醒后，出现神经功能障碍，精神状态差，毛发无光泽，活动时出现转圈，评分升高，在术后3d时最为严重，出现倾倒或肢体瘫痪；随时间推移神经功能障碍逐渐减轻，Longa评分降低。与Sham组相比，出血各组大鼠相应时间点神经行为学评分升高，差异具有统计学意义（P<0.05），与ICH模型组相比，ICH+3MA干预组在5d前各对应时间点神经行为学评分均低于ICH模型组（P<0.05）。图2大鼠脑出血后行为学表现表1不同时间点大鼠神学检查评分比较（±s，n=10）组别0.5d1d2d3d5dSham组00000ICH组1.71±0.54*1.83±0.48*2.26±0.45*2.67±0.34*1.81±0.53*ICH+3MA组1.47±0.56#1.58±0.67#1.96±0.51#2.16±0.47#1.76±0.49注：*与Sham组比，P<0.05；#与ICH模型组比，P<0.051.2.2大鼠脑出血后脑组织形态学变化观察HE染色各组大鼠脑组织切片，Sham组脑组织基底节区切片未见明显病理学变化，脑组织内神经细胞形态清晰，排列整齐而紧密，细胞胞体大，胞质均匀淡染，核仁明显，细胞核呈淡蓝色染。肉眼观察，ICH模型脑组织有出血灶形成，
-14-可见明显占位效应，出血灶周围可见明显血肿；镜下观察，可见血肿周围脑组织有大量红细胞，细胞排列疏松、不规则，细胞外间隙变大，细胞核失去正常形态，神经细胞出现变性、坏死，此现象以3d时最为显著，细胞结构多不完整，周围可见大量炎性细胞浸润，至5d时缓解。ICH+3MA组神经细胞变化较ICH模型组减轻（图3、图4）。图3大鼠脑出血血肿位置A—Sham组（×100）；B—ICH模型组（×100）；C—ICH+3MA组（×100）；D—Sham组（×400）；E—ICH模型组（×400）；F—ICH+3MA组（×400）。图4各组大鼠脑组织染色结果(HE染色)1.2.3尼氏染色观察脑组织切片尼氏染色切片置于显微镜下观察，Sham组神经元细胞形态完整，尼氏小体大且数量多。与Sham组相比，ICH模型组脑组织神经细胞尼氏小体0.5d开始减少，脑组织出现水肿，随时间推移，尼氏小体逐渐减少，至3d神经细胞及尼氏小体数量显著减少，神经细胞胞体变小，细胞核碎裂，细胞间隙大，细胞间质水肿，随机
本文编号：3326747
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠脑出血模型制备过程
-13-1.2结果1.2.1脑出血模型及神经行为学检查结果各组大鼠手术前神经行为学均无异常。脑出血大鼠模型制作过程中因麻醉、术后感染等原因死亡11只，死亡大鼠作为缺失值剔除，并在后续试验中补充。手术后，根据Longa评分法[20]，对实验大鼠神经功能进行评定。Sham组大鼠在完全清醒后，无明显神经功能障碍，肢体活动自如，刺激肢体痛觉反应灵敏，神经学检查评分为0分。ICH模型组、ICH+3MA组大鼠完全清醒后，出现神经功能障碍，精神状态差，毛发无光泽，活动时出现转圈，评分升高，在术后3d时最为严重，出现倾倒或肢体瘫痪；随时间推移神经功能障碍逐渐减轻，Longa评分降低。与Sham组相比，出血各组大鼠相应时间点神经行为学评分升高，差异具有统计学意义（P<0.05），与ICH模型组相比，ICH+3MA干预组在5d前各对应时间点神经行为学评分均低于ICH模型组（P<0.05）。图2大鼠脑出血后行为学表现表1不同时间点大鼠神学检查评分比较（±s，n=10）组别0.5d1d2d3d5dSham组00000ICH组1.71±0.54*1.83±0.48*2.26±0.45*2.67±0.34*1.81±0.53*ICH+3MA组1.47±0.56#1.58±0.67#1.96±0.51#2.16±0.47#1.76±0.49注：*与Sham组比，P<0.05；#与ICH模型组比，P<0.051.2.2大鼠脑出血后脑组织形态学变化观察HE染色各组大鼠脑组织切片，Sham组脑组织基底节区切片未见明显病理学变化，脑组织内神经细胞形态清晰，排列整齐而紧密，细胞胞体大，胞质均匀淡染，核仁明显，细胞核呈淡蓝色染。肉眼观察，ICH模型脑组织有出血灶形成，
-14-可见明显占位效应，出血灶周围可见明显血肿；镜下观察，可见血肿周围脑组织有大量红细胞，细胞排列疏松、不规则，细胞外间隙变大，细胞核失去正常形态，神经细胞出现变性、坏死，此现象以3d时最为显著，细胞结构多不完整，周围可见大量炎性细胞浸润，至5d时缓解。ICH+3MA组神经细胞变化较ICH模型组减轻（图3、图4）。图3大鼠脑出血血肿位置A—Sham组（×100）；B—ICH模型组（×100）；C—ICH+3MA组（×100）；D—Sham组（×400）；E—ICH模型组（×400）；F—ICH+3MA组（×400）。图4各组大鼠脑组织染色结果(HE染色)1.2.3尼氏染色观察脑组织切片尼氏染色切片置于显微镜下观察，Sham组神经元细胞形态完整，尼氏小体大且数量多。与Sham组相比，ICH模型组脑组织神经细胞尼氏小体0.5d开始减少，脑组织出现水肿，随时间推移，尼氏小体逐渐减少，至3d神经细胞及尼氏小体数量显著减少，神经细胞胞体变小，细胞核碎裂，细胞间隙大，细胞间质水肿，随机
本文编号：3326747
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