L-periaxin蛋白核输出机制的初步分析

发布时间：2021-08-07 03:32

　　腓骨肌萎缩症（Charcot-Marie-Tooth, CMT）亦称为遗传性运动感觉神经病（HMSN）,具有明显的遗传异质性,根据临床和电生理特征,CMT分为脱髓鞘型和轴突型。轴突周围蛋白（periaxin）是非致密髓鞘有髓施万细胞特异表达蛋白,根据mRNA不同的剪切方式,periaxin基因可以编码两种长短不同的蛋白,分别为L-periaxin （L-PRX）和S-periaxin （S-PRX）。L-PRX蛋白一般包含PDZ结构域、NLS结构域、repeat结构域以及C末端的acidic结构域；S-PRX蛋白只含有PDZ结构域。Periaxin基因突变将导致脱髓鞘型腓骨肌萎缩症4F亚型（CMT4F）的发生。Periaxin蛋白是一个胞内蛋白,从表达之初到最终定位在成熟髓鞘的远轴端的膜脂筏中,不断发生细胞内位置的变化。Peraxin蛋白亚细胞定位的变化可能与其稳定髓鞘的功能密切相关。本文围绕L-PRX蛋白的PDZ结构域展开以下工作。首先,将来源于人的L-PRX及其PDZ结构域缺失突变体基因,克隆至真核表达载体pEGFP载体,并在大鼠雪旺细胞（RSC96）中表达,结果显示PDZ结构域存... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1.1 腓骨肌萎缩症
    1.2 轴突周围蛋白(periaxin)
        1.2.1 核定位信号(NLS)
        1.2.2 PDZ domain
        1.2.3 L-PRX蛋白的repeat domain和acidic domain
    1.3 受体调节的核输入与核输出机制
    参考文献
第二章 L-PRX亚细胞定位及其核输出序列的分析鉴定
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 菌株和质粒
        2.2.2 细胞系
        2.2.3 主要的酶和生化试剂
    2.3 实验仪器
    2.4 实验方法
        2.4.1 载体构建
        2.4.2 细胞培养及基因转染
        2.4.3 生物信息学分析
        2.4.4 定点突变
        2.4.5 Leptomycin B(LMB)处理细胞
    2.5 实验结果
        2.5.1 EGFP融合表达载体的构建
        2.5.2 L-PRX-PDZ domain介导L-PRX蛋白的细胞质定位
        2.5.3 L-PRX-PDZ与cyclinAl融合蛋白定位于细胞质中
        2.5.4 L-PRX-PDZ domain含有亮氨酸富集型NES信号
        2.5.5 Leptomycin B(LMB)抑制L-PRX及L-PRX-PDZ-cyclinAl蛋白的核输出
        2.5.6 L_(83,85)/Q突变使L-PRX和L-PRX-PDZ-cyclinAl蛋白聚集于细胞核内
    2.6 讨论
    参考文献
第三章 H_2O_2氧化调节L-PRX PDZ domain二聚化分析
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 菌株和质粒
        3.2.2 细胞系
        3.2.3 主要的酶和生化试剂
    3.3 实验仪器
    3.4 实验方法
        3.4.1 载体构建
        3.4.2 重组蛋白的表达与纯化
        3.4.3 H_2O_2保温处理L-PRX-PDZ蛋白
        3.4.4 Western blot
    3.5 实验结果
        3.5.1 L-PRX PDZ体外经H_2O_2处理可以形成二聚体
        3.5.2 H_2O_2氧化介导细胞内L-PRX蛋白二聚化
    3.6 讨论
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式


【参考文献】：
期刊论文
[1]Periaxin蛋白中PDZ结构域的重组表达与纯化[J]. 石亚伟,任燕,刘俊林,杨廷.  山西大学学报(自然科学版). 2012(01)
[2]腓骨肌萎缩症研究概述[J]. 孙顺昌,张海鸥.  中国神经精神疾病杂志. 2010(01)
[3]轴突影响施万细胞分化与整合素α6β4表达[J]. 钟延丰,任碧和,王立军,由江峰,王盛兰,王薇,杨金辉,胡白和.  北京大学学报(医学版). 2001(02)



本文编号：3326993