四硫钼酸铵调节Wilson病铜负荷大鼠铜代谢及MAPK相关信号转导机制的研究

发布时间：2021-08-10 04:05

　　研究背景Wilson病（Wilson disease, WD）是少数可以治疗的神经遗传病之一。目前以青霉胺（Penicillamine, PCA）为代表的金属鳌合剂虽具有尿排铜量高、症状改善显著等优点，但其不良反应较多。锌剂等减少铜吸收的药物虽不良反应少，但排铜作用较弱，多用于症状前期患者或维持治疗。因此，WD的治疗亟待出现效果好、副作用少的WD治疗药物。四硫钼酸铵（Tetrathiomolybdate, TM）是一种铜离子的螯合剂，被吸收入血后与白蛋白和血铜形成一种无毒性的三集团复合物，竞争抑制肠粘膜对铜的吸收，从而可以有效促进铜排出，降低游离铜的浓度。目前已有TM治疗WD获得成功的报道，并发现其对肝脏和脑组织的损害有一定疗效。因目前该药尚在临床试验阶段，其具体疗效机制及不良反应尚未明确。铜负荷大鼠模型的肝、肾组织可产生类似于WD的铜沉积，且具有价格低廉、重复性好、易于获得等优点，是一种较好的研究WD病理病机和药物治疗学的动物模型。研究表明，肝损害是WD患者最常见的临床表现，而肝纤维化是其最常见的病理改变。目前发现P38、细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulat... 

【文章来源】：安徽中医药大学安徽省

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词语中英文对照
第一部分 Wilson 病的中西医结合治疗研究现状
    1 WD 的中医病因病机
    2 WD 的辩证分型及临床表现
    3 WD 的中医药治疗
        3.1 辨证分型论治
        3.2 专病专方治疗
        3.3 中西医结合治疗
    4 问题与展望
第二部分 实验研究
    前言
    实验一 四硫钼酸铵对铜负荷大鼠铜相关代谢的调节
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
                1.1.1 实验动物及实验条件
                1.1.2 实验仪器与试剂
                1.1.3 实验药物
            1.2 实验技术路线与方法
                1.2.1 建立 WD 铜负荷大鼠模型
                1.2.2 给药方法
                1.2.3 标本取材及处理
                1.2.4 观察及检测指标
                    ⑴ 大鼠体重、皮毛、精神等一般情况
                    ⑵ 微量元素的检测
                        ① 血清微量元素的检测
                        ② 肝、脑微量元素的检测
            1.3 数据统计及处理
        2 实验结果
            2.1 大鼠体重、皮毛、精神等一般情况变化
            2.2 WD 铜负荷大鼠不同周份血清 Cu 等微量元素的变化
            2.3 TM 治疗前后 WD 铜负荷大鼠微量元素的的变化
                2.3.1 TM 治疗前后 WD 铜负荷大鼠血清微量元素的的变化
                2.3.2 钼对其它微量元素的影响
                2.3.3 TM 治疗前后 WD 铜负荷大鼠肝组织微量元素的变化
                2.3.4 TM 治疗前后 WD 铜负荷大鼠脑组织微量元素的变化
            2.4 TM 对 WD 铜负荷大鼠血常规、肝、肾功能的影响
                2.4.1 TM 对 WD 铜负荷大鼠血常规的影响
                2.4.2 TM 对 WD 铜负荷大鼠肝功能的影响
                2.4.3 TM 对 WD 铜负荷大鼠肾功能的影响
        3 讨论
            3.1 WD 的治疗学研究
            3.2 铜负荷大鼠模型建立依据
            3.3 TM 对 WD 铜负荷大鼠血常规、肝功能、肾功能的影响
                3.3.1 TM 对 WD 铜负荷大鼠血常规的影响
                3.3.2 TM 对 WD 铜负荷大鼠肝功能的影响
                3.3.3 TM 对 WD 铜负荷大鼠肾功能的影响
            3.4 TM 对铜负荷大鼠铜等微量元素的影响机制
                3.4.1 微量元素钼在体内代谢过程
                3.4.2 TM 对铜的影响
                3.4.3 TM 对铁的影响
                3.4.4 TM 对锌的影响
                3.4.5 TM 对硒、锰、钴、铬等机体必需微量元素的影响
                3.4.6 TM 对机体非必需微量元素的影响
    实验二 四硫钼酸铵调节 Wilson 病铜负荷大鼠 MAPK 相关信号转导机制的研究
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
                1.1.1 实验动物
                1.1.2 实验仪器、试剂及配制
                    （1） 实验仪器
                    （2） 实验试剂
                    （3） 主要实验试剂的配制
                1.1.3 实验药品
            1.2 实验方法
                1.2.1 大鼠模型复制、给药及标本留取
                1.2.2 免疫组织化学-DAB 显色法检测 TM 治疗前后 P38、ERK、JNK 蛋白表达
                    （1） 二步法免疫组织化学染色
                    （2） 显微镜计算机图象分析
                1.2.3 Western-blot 法检测 TM 治疗前后 P38、ERK、JNK 蛋白表达
            1.3 数据统计及处理
        2 结果
            2.1 TM 治疗前后免疫组织化学-DAB 显色法检测肝组织 P38、ERK、JNK 蛋白表达
            2.2 TM 治疗前后免疫组织化学-DAB 显色法检测脑组织 P38、ERK、JNK 蛋白表达
            2.3 TM 治疗前后 Western-blot 法检测肝组织 P38、ERK、JNK 蛋白表达
            2.4 TM 治疗前后 Western-blot 法检测脑组织 P38、ERK、JNK 蛋白表达
        3 讨论
            3.1 TM 对 WD 铜负荷大鼠肝损害的疗效及机制
            3.2 TM 对 WD 铜负荷大鼠肝脏丝裂原活化蛋白激酶的影响
                3.2.1 TM 对大鼠肝组织 P38 蛋白的影响
                3.2.2 TM 对大鼠肝组织 ERK 蛋白的影响
                3.2.3 TM 对大鼠肝组织 JNK 蛋白的影响
                3.2.4 TM 对 WD 铜负荷大鼠大脑 P38、ERK、JNK 蛋白的影响
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]中医对肝豆状核变性病因病机及辨证论治的探索[J]. 杨文明,韩辉,鲍远程,汪瀚,谢道俊,汪美霞,张波,陈怀珍.  北京中医药大学学报(中医临床版). 2012(04)
[2]从络病理论探讨肝豆状核变性的发病机制[J]. 王共强,叶群荣,马心锋.  中西医结合肝病杂志. 2011(04)
[3]中国成年男子元素粪排出量研究[J]. 刘庆芬,高建政,樊体强,高艳辉,诸洪达,武权.  中国辐射卫生. 2011(02)
[4]锌、铜对实验性钼中毒绵羊肝脏、肾脏中钼含量的影响[J]. 杨自军,张才,王宏伟,刘凤军,冉林武,汪纪仓.  中国兽医学报. 2011(06)
[5]新疆南疆两县部分地区牧草-土壤-动物组织微量元素含量的测定[J]. 斯坎达尔·买合木提,高超.  新疆农业大学学报. 2011(02)
[6]神奇的金属——钼[J]. 武洲,孙院军.  中国钼业. 2010(02)
[7]中医论治肝豆状核变性的思路与方法[J]. 王殿华,陈金亮.  中医杂志. 2010(02)
[8]柴黄肝豆散治疗肝豆状核变性59例临床观察[J]. 陈金亮,王殿华.  四川中医. 2010(01)
[9]肝豆状核变性肝组织的超微结构观察[J]. 张巧英,印洪林,姜少军,石群立,周晓军.  临床与实验病理学杂志. 2009(02)
[10]疏肝利胆排毒汤治疗肝豆状核变性38例临床观察[J]. 王殿华,陈金亮,袁学山.  中医杂志. 2009(02)

博士论文
[1]铜负荷大鼠肝星状细胞凋亡p38MAPK信号通路探讨及通腑利湿化瘀散结方对其干预的代谢组学研究[D]. 张娟.湖北中医药大学 2012



本文编号：3333419