RKIP/miR-98在胶质瘤生长转移机制中的作用研究

发布时间：2021-08-15 09:52

　　目的：胶质瘤是最常见的脑内原发性的肿瘤,其发病率在所有颅内肿瘤中居第一位。其中,IV型胶质瘤的恶性程度最强。尽管目前临床上普遍开展了手术、放疗、化疗等多种治疗方法,但胶质瘤患者的预后仍然较差,其5年生存率大约10%。由于IV型胶质瘤的侵袭性很强,对现有化疗药物普遍存在耐药性,所以迫切需要更多的研究来优化治疗手段。探索胶质瘤发生、发展的新治疗靶点,可能为提高胶质瘤的临床治疗效果带来希望。有研究表明,RAS/RAF信号通路在胶质瘤的发生、发展中起到重要的作用。其中,Raf-1激酶抑制蛋白（Raf-1kinase inhibitor protein,RKIP）属于磷脂酰乙醇胺家族的一员,参与调控恶性肿瘤。有研究发现,RKIP能通过抑制Raf-1-MEK1/2-ERK1/2和NF-κB信号通路的活性,从而抵消这两条信号通路促生存、抗凋亡的作用,最终抑制肿瘤细胞的生长。过表达RKIP可以增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。然而,RKIP在胶质瘤中的作用及相关机制,目前尚不清楚。MicroRNA是一类长度大约为19-25个核糖核酸的小分子RNA,自从1998年在线虫上首次发现后,其表达和功能逐渐被广为... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

一正常人胶质细胞和胶质瘤细胞中RKIPmRNA的表达

博士学位论文 2 RKIP在胶质瘤中的表达及作用2.4.2胶质瘤细胞中RKIP的表达选取正常人胶质细胞HEB细胞作为control，SHG44, U251, U87三株胶质瘤细胞作为实验组，如图2-2，2-3所示，RKIP相较于control组，在各胶质瘤细胞株中表达明显降低，P值在SHG44, U251, U87三株胶质瘤细胞与control组比较中分别为0.0204，0.0048，0.0083，具有统计学意义；Western blot结果显示RKIP在胶质瘤细胞中的表达水平也明显低于正常胶质细胞，尤其在U251，U87细胞中差异最为明显。因此，接下来实验细胞株选用U251，U87。此处Real-time PCR实验均以P-actin为内参，得到的溶解曲线为单峰，即表示所获得PCR产物为特异性产物。 P=0.0083

图2-7 U251细胞中过表达RKIP对细胞增殖能力的影响2.4.5过表达RKIP对U87，IJ251细胞侵袭能力的影响在胶质瘤细胞U87，U251细胞中分别加入空白慢病毒对照和RKIP过表达慢病毒，得到三组实验组，Control，Vector转染组，RKIP转染组。将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室的上层培养液分别加入80%汇合度的以上3组处理细胞。下室内盛装下层培养液，即完全培养液，上下层培养液（无血清培养液）以聚碳酸酯膜相隔。我们将胶质瘤细胞U87，U251种在上室内，由于聚碳酸酷膜有通透性，下层培养液中趋化因子胎牛血清可以影响到上室内的细胞，诱导其加速其侵袭转移到培养板内，即下室。24h后，将聚碳酸酷膜下层面进行Gimsa染色，拍照，得到如图2-8，2-9结果。结果显示，相比于空白对照组和空白质粒转染组，RKIP转染组的蓝紫色染色细胞显著减少，提示RKIP过表达可抑制胶质瘤细胞U87，U251的侵袭转移能力。

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-20b, miR-98, miR-125b-1*, and let-7e* as new potential diagnostic biomarkers in ulcerative colitis[J]. Mehmet Coskun,Jacob Tveiten Bjerrum,Jakob Benedict Seidelin,Jesper Thorvald Troelsen,JΦrgen Olsen,Ole Haagen Nielsen.  World Journal of Gastroenterology. 2013(27)
[2]高迁移率蛋白A2在浆液性卵巢癌中高表达及其与let-7家族microRNA的关系[J]. 杨静,张旗,董建强,昌晓红,何湘君.  北京大学学报(医学版). 2012(05)



本文编号：3344323