神经细胞凋亡中NOX2-ROS介导AMPK/Akt-mTOR信号转导及调控分子机理研究

发布时间：2021-08-16 13:46

　　本研究采用Western Blot分析、荧光蛋白标记、台盼蓝染色、RNA干扰、DNA剪切、DAPI和TUNEL染色等细胞和分子生物学技术及方法,以PC12细胞、SH-SY5Y细胞、小鼠原代神经元为实验对象,通过建立的镉染毒细胞模型和细胞PD模型,较为系统地解析了 NOX2-ROS介导AMPK/Akt-mTOR信号转导在神经细胞凋亡中的作用及其调控分子机理。结果如下:1雷公藤红素调控AMPK/mTOR信号涉及抗镉诱导神经细胞凋亡以PC12细胞、SH-SY5Y细胞或原代神经元、或用shRNAmTOR和shRNA GFP感染的PC12细胞为实验对象,用雷公藤红素（1 μM）预处理1h,接着暴露10和20 μM镉4 h或24 h。台盼蓝染色分析细胞存活、观察细胞形态、DAPI和TUNEL染色评估细胞凋亡表现;荧光标记分析Caspase-3/7活性;Western Blot分析 ACC、AMPK、mTOR、S6K1、4E-BP1、Cleaved-caspase-3 等蛋白表达。结果显示,雷公藤红素显著抑制镉诱导细胞活力下降和凋亡升高,以及Caspase-3/7活性和Cleaved-caspase... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：186 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１细胞凋亡示意图??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??

或Ｃａｓｐａｓｅ－９，从而引起细胞凋亡。同时，半胱天冬酶也可以响应于线粒体的变??化和细胞色素ｃ释放活性，激活的ＤＮＡ酶切割ＤＮＡ为碎片样［２＼从而导致细??胞凋亡，如图１－２，即其形态学和生化特征Ｍ。??Ｄｅａｔｈ?ｓｉｇｎａｌｓ?？?Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ??？?Ｇｌｕｔａｍａｉｆ；??？?Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ－ｆａｃｌｏｒｓ?Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ????＾?？?Ｇｅｎｅｔｉｃ?ｍｕｔａｔｉｏｎ????ｙ’?１?ｒ?Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ?ｃ?＼?Ｂｌｅｂｓ??Ｏｘｙｇｅｎ?ｒａｄｉｃａｔｅ／Ｃａ２＋?ｊ?Ａｐａｆ－１?、、？、?＼??，／?Ｘ?．／?ｆＣａｓｐａｓｅ－９?＼?ＸＸ??＃?ｆ?＼?／?Ｊ?ｗ?Ｄｅａｔｈ?ｆ?Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ?＼??／?ｐａｒ－４?／?ｆ?＾＾ｕｂｓ｛ｒａｔｅｓ＼?／?Ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ?＼??Ｉ?Ｂａｘ．?Ｂａｄ?＾?＼?ｉ?Ｃａｓｐａｓｅ－３?＾?＾?？??＼?Ｋ?Ｎｕｃｌｅｕｓ?）／?＼?；／?Ｃｘ??Ｖ?＼?Ｍｉｔ？Ａｄｎｃｉｒｉ〇ｎ?）?＼?ｊｆ?＼?＼ｐｘｙｆａｄｉｃｆｅｌｌ／Ｇａ２７?＼?ｊｌ?＼?＾＇＜３＾?＾??＾：：：ｙ?Ｖ；＞??Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ?ｐｈａｓｅ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?ｐｈａｓｅ?Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ?ｐｈａｓｅ??图１－２细胞凋亡形态学特点和生化特征［７］??Ｆｉｇ．?１－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ａｎｄ?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｆｅａｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［７］??１．３细胞凋亡的基因表达??参与细胞凋亡调控的基因有很多

＾ｇｇｇｍ??Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ??图２－１自由基对蛋白质、ＤＮＡ和脂类等生物分子的影响⑷??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｆｒｅｅ?ｒａｄｉｃａｌｓ?ｏｎ?ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ??ｐｒｏｔｅｉｎｓ，?ＤＮＡ，?ｌｉｐｉｄｓ，?ｅｔｃ？卩Ｉ??２?ＮＡＤＰＨ氧化酶（ＮＯＸｓ）家族??ＲＯＳ对神经元的更直接的作用是通过几种酶的激活，如ＮＡＤＰＨ氧化酶??（ＮＡＤＰＨ?ｏｘｉｄａｓｅｓ，ＮＯＸｓ），诱生型—氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ?ｎｉｔｒｉｃ?ｏｘｉｄｅ?ｓｙｎｔｈａｓｅ，??ｉＮＯＳ），脂氧合酶和环氧合酶（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，?ＣＯＸ）等的表达［２３］。其中越来??越多的证据表明，ＮＯＸｓ作为一个把电子传送到质膜并产生超氧化物的酶复合??物，对细胞内ＲＯＳ的产生起着重要的作用［２６］。而神经系统细胞含有ＮＯＸｓ复合??体，当其组装并且被激活时，随即引发大量的自由基导致组织损伤［２７］。??２．１?ＮＯＸｓ家族的种类??二十世纪八十年代


本文编号：3345784