改良方法获取许旺细胞组建的组织工程化神经对神经缺损修复的实验研究
发布时间：2021-08-21 10:03
目的:研究周围神经体外预变性的新方法,以便在短期内获得大量高效许旺细胞,观察其组建的组织工程化神经对坐骨神经缺损再生效果。方法:许旺细胞培养:6-8周龄清洁级C57BL/6小鼠骨髓源细胞（BMDCs）与其坐骨神经体外共培养为实验A组,无BMDCs介入的坐骨神经体外培养为对照B组。培养7d后行大体观察,复合酶消化预变后的神经片段,行许旺细胞培养。将两组许旺细胞配成浓度为1x10/ml。组织工程化神经的体外组建及实验动物分组、建模:分别组建许旺细胞-细胞外基质-聚乳酸管（PLA）的组织工程化神经。随机把40只6-8周龄清洁级C57BL/6小鼠分成4组,每组10只。建立小鼠坐骨神经缺损模型,坐骨神经保持5mm缺损。将A、B组许旺细胞配成浓度为1x10/ml,组建许旺细胞-细胞外基质-聚乳酸管（组织工程化神经）,修复C57BL/6小鼠5mm坐骨神经缺损模型,建立小鼠A、B组模型。同时建立C组（细胞外基质-聚乳酸管修复5mm坐骨神经缺损）和自体神经移植D组（切断坐骨神经,倒置端端外膜缝合）。检测指标:坐骨神经体外培养大体观察;许旺细胞数量和纯度大致观察。实验动物建模后12周行大体观测、电生理检查...
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
长6mm、内径为0.6mm、厚为0.1mm的聚乳酸（PLA）神经导管
腓总、胫神经端）以近 3mm 处切除向心侧 5mm 长的神经片段，倒置端端缝合，建立自体神经移植的 D 组（见图 2.2）。在放大 10 倍的显微镜下用 10-0 无创线间断缝合组织工程化神经导管（或自体神经）与神经外膜，要求无张力，神经纤维乳突无外露，共缝合 4 针。4-0 慕丝线逐层进行缝合，手术完毕。观察照看手术后的 C57BL/6 小鼠，设置空调为 26℃，注意保暖，侧卧位休息，必要时触碰术后的C57BL/6 小鼠，防止 C57BL/6 小鼠因麻醉过深死去。待小鼠完全清醒后予以饲料和饮用水，A、B、C、D 四组 C57BL/6 小鼠术后 12 周进行功能检测及组织切片检查。注：A 组为实验组，许旺细胞为坐骨神经片段与骨髓源细胞(BMDCs)共培养获得的。B、C、D 三组为对照组。B 组的许旺细胞是坐骨神经仅在许旺细胞培养基中培养，无骨髓源细胞(BMDCs)参与。C 组为细胞外基质-聚乳酸管，无许旺细胞组建。D 组为自体神经移植（切取 5mm 坐骨神经，倒置端端缝合）。
腓总、胫神经端）以近 3mm 处切除向心侧 5mm 长的神经片段，倒置端端缝合，建立自体神经移植的 D 组（见图 2.2）。在放大 10 倍的显微镜下用 10-0 无创线间断缝合组织工程化神经导管（或自体神经）与神经外膜，要求无张力，神经纤维乳突无外露，共缝合 4 针。4-0 慕丝线逐层进行缝合，手术完毕。观察照看手术后的 C57BL/6 小鼠，设置空调为 26℃，注意保暖，侧卧位休息，必要时触碰术后的C57BL/6 小鼠，防止 C57BL/6 小鼠因麻醉过深死去。待小鼠完全清醒后予以饲料和饮用水，A、B、C、D 四组 C57BL/6 小鼠术后 12 周进行功能检测及组织切片检查。注：A 组为实验组，许旺细胞为坐骨神经片段与骨髓源细胞(BMDCs)共培养获得的。B、C、D 三组为对照组。B 组的许旺细胞是坐骨神经仅在许旺细胞培养基中培养，无骨髓源细胞(BMDCs)参与。C 组为细胞外基质-聚乳酸管，无许旺细胞组建。D 组为自体神经移植（切取 5mm 坐骨神经，倒置端端缝合）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pre-degenerated peripheral nerves co-cultured with bone marrow-derived cells: a new technique for harvesting high-purity Schwann cells[J]. Xiao-pan Wang,Min Wu,Jian-zhong Guan,Zhao-dong Wang,Xu-bin Gao,Yang-yang Liu. Neural Regeneration Research. 2016(10)
[2]Ganglioside promotes the bridging of sciatic nerve defects in cryopreserved peripheral nerve allografts[J]. Yaodong Wang,Yuguang Liu,Qiang Liu. Neural Regeneration Research. 2014(20)
[3]组织工程化神经修复周围神经创伤的应用[J]. 傅重洋,赵佳,曲巍. 中国组织工程研究. 2013(41)
[4]组织工程化神经修复周围神经缺损的研究进展[J]. 曹常松,张基仁. 中华创伤杂志. 2010 (06)
[5]甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管的实验研究[J]. 沈华,沈尊理,张佩华,张俊锋,贾万新,张兆锋,黄一雄. 中国修复重建外科杂志. 2005(11)
[6]人工神经预构的研究进展[J]. 何继银,劳杰. 中国修复重建外科杂志. 2005(09)
[7]小肠粘膜下层（SIS）桥接周围神经缺损的实验研究[J]. 苏琰,张长青,孙鲁源,张晔,曾炳芳. 中华创伤骨科杂志. 2004(10)
本文编号：3355391
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
长6mm、内径为0.6mm、厚为0.1mm的聚乳酸（PLA）神经导管
腓总、胫神经端）以近 3mm 处切除向心侧 5mm 长的神经片段，倒置端端缝合，建立自体神经移植的 D 组（见图 2.2）。在放大 10 倍的显微镜下用 10-0 无创线间断缝合组织工程化神经导管（或自体神经）与神经外膜，要求无张力，神经纤维乳突无外露，共缝合 4 针。4-0 慕丝线逐层进行缝合，手术完毕。观察照看手术后的 C57BL/6 小鼠，设置空调为 26℃，注意保暖，侧卧位休息，必要时触碰术后的C57BL/6 小鼠，防止 C57BL/6 小鼠因麻醉过深死去。待小鼠完全清醒后予以饲料和饮用水，A、B、C、D 四组 C57BL/6 小鼠术后 12 周进行功能检测及组织切片检查。注：A 组为实验组，许旺细胞为坐骨神经片段与骨髓源细胞(BMDCs)共培养获得的。B、C、D 三组为对照组。B 组的许旺细胞是坐骨神经仅在许旺细胞培养基中培养，无骨髓源细胞(BMDCs)参与。C 组为细胞外基质-聚乳酸管，无许旺细胞组建。D 组为自体神经移植（切取 5mm 坐骨神经，倒置端端缝合）。
腓总、胫神经端）以近 3mm 处切除向心侧 5mm 长的神经片段，倒置端端缝合，建立自体神经移植的 D 组（见图 2.2）。在放大 10 倍的显微镜下用 10-0 无创线间断缝合组织工程化神经导管（或自体神经）与神经外膜，要求无张力，神经纤维乳突无外露，共缝合 4 针。4-0 慕丝线逐层进行缝合，手术完毕。观察照看手术后的 C57BL/6 小鼠，设置空调为 26℃，注意保暖，侧卧位休息，必要时触碰术后的C57BL/6 小鼠，防止 C57BL/6 小鼠因麻醉过深死去。待小鼠完全清醒后予以饲料和饮用水，A、B、C、D 四组 C57BL/6 小鼠术后 12 周进行功能检测及组织切片检查。注：A 组为实验组，许旺细胞为坐骨神经片段与骨髓源细胞(BMDCs)共培养获得的。B、C、D 三组为对照组。B 组的许旺细胞是坐骨神经仅在许旺细胞培养基中培养，无骨髓源细胞(BMDCs)参与。C 组为细胞外基质-聚乳酸管，无许旺细胞组建。D 组为自体神经移植（切取 5mm 坐骨神经，倒置端端缝合）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pre-degenerated peripheral nerves co-cultured with bone marrow-derived cells: a new technique for harvesting high-purity Schwann cells[J]. Xiao-pan Wang,Min Wu,Jian-zhong Guan,Zhao-dong Wang,Xu-bin Gao,Yang-yang Liu. Neural Regeneration Research. 2016(10)
[2]Ganglioside promotes the bridging of sciatic nerve defects in cryopreserved peripheral nerve allografts[J]. Yaodong Wang,Yuguang Liu,Qiang Liu. Neural Regeneration Research. 2014(20)
[3]组织工程化神经修复周围神经创伤的应用[J]. 傅重洋,赵佳,曲巍. 中国组织工程研究. 2013(41)
[4]组织工程化神经修复周围神经缺损的研究进展[J]. 曹常松,张基仁. 中华创伤杂志. 2010 (06)
[5]甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管的实验研究[J]. 沈华,沈尊理,张佩华,张俊锋,贾万新,张兆锋,黄一雄. 中国修复重建外科杂志. 2005(11)
[6]人工神经预构的研究进展[J]. 何继银,劳杰. 中国修复重建外科杂志. 2005(09)
[7]小肠粘膜下层（SIS）桥接周围神经缺损的实验研究[J]. 苏琰,张长青,孙鲁源,张晔,曾炳芳. 中华创伤骨科杂志. 2004(10)
本文编号：3355391
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3355391.html
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