激活JNK后对神经胶质瘤抑瘤效果的探究

发布时间：2021-08-28 23:24

　　本文使用茴香霉素激活神经胶质瘤U251细胞内c-jun氨基末端激酶（JNK）活性,实现激活后的JNK对神经胶质瘤抑瘤效果的探究,并找到受JNK调节的关键转录因子。试验首先利用在线分析网站预测出受JNK调节的相关肿瘤模型,通过使用茴香霉素（JNK激动剂）实现对细胞内磷酸化JNK（P-JNK）水平的有效调节,并通过蛋白质印迹法（Western blot）探究其发挥作用的最适条件;然后通过Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测、细胞计数、细胞划痕和流式细胞检测等试验,探究激活后的JNK对U251细胞的增殖、迁移能力以及细胞周期的影响;最后通过转录组测序（RNA-seq）技术分析找到受JNK调节的关键转录因子。试验结果表明:生物信息数据分析JNK与神经胶质瘤的发生和发展存在很强的相关性;1.0μg/mL茴香霉素作用于神经胶质瘤U251细胞1.0 h后,可有效激活细胞内源性JNK活性,抑制细胞的增殖和迁移,并导致细胞周期阻滞;RNA-seq分析揭示了JNK可能通过调节P53活性实现抑制神经胶质瘤的生长。本文研究发现,激活JNK后能够对神经胶质瘤产生抑瘤效果,为JNK可作为神经胶... 

【文章来源】：激光生物学报. 2020,29(05)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

在线网站分析JNK与神经胶质瘤之间的相关性

将U251细胞传代至6 cm培养皿中，保证每皿细胞密度相同。待细胞完全贴壁后，在4皿细胞中分别加入不同质量浓度（0.5、1.0、1.5、2.0μg/mL）的茴香霉素作为试验组，另一皿空白细胞中加入DMSO作为对照组。培养箱放置1 h后，收集蛋白，做Western blot检测，试验结果表明茴香霉素质量浓度为1.0μg/mL时激活JNK效果最好，具体结果如图2a所示。同样的方法传代细胞，DMSO处理的为对照组，1μg/mL的茴香霉素分别处理不同时间（0.5、1.0、1.5 h）的细胞为试验组。将蛋白收集，做Western blot检测，发现茴香霉素处理细胞的时间为1.0 h时JNK的激活效果最好，结果如图2b所示。因此可以得出结论，质量浓度为1μg/mL、处理时间为1.0 h的茴香霉素激活U251细胞中JNK的效果最好。2.3 激活JNK后能够抑制U251的细胞增殖

将U251细胞铺12孔板，待细胞密度达到100%时，进行划痕试验来分析细胞的运动能力。用DMSO处理的为对照组（图4a1、4a2），用同体积1.0μg/m L茴香霉素处理的孔为试验组（图4a3、4a4），分别在0 h（图4a1、4a3）、24.0 h（图4a2、4a4）时观察划痕宽度的变化并拍照。试验发现24.0 h后对照组细胞划痕被分裂增殖的细胞愈合，宽度明显变窄，而试验组细胞划痕宽度未出现任何变化（图4a）。上述试验结果表明，细胞内源JNK活性被激活后，U251细胞的迁移能力受到了显著抑制。为了进一步揭示细胞迁移能力的变化，采用qRT-PCR分析了E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）的表达水平。E-cad是人黏附因子，其表达水平与细胞的迁移能力呈负相关[15]。试验结果显示，当JNK被激活后，E-cad基因的表达量随之上升（图4b），且差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测，E-cad蛋白的表达量也呈现相同的趋势（图4c）。上述试验说明在U251细胞中依靠药物活化的JNK，抑制了U251细胞的迁移能力。2.5 激活JNK后能够引起U251细胞周期的阻滞


本文编号：3369430