小胶质细胞自噬对α-synuclein诱导的神经炎症的调控作用及机制
发布时间：2021-09-05 21:20
研究目的:研究表明神经炎症和自噬功能缺陷可能参与了帕金森病发病机制。以往的研究主要聚焦于多巴胺神经元自噬活性的变化及其调控,很少有研究关注小胶质细胞自噬是否参与或介导帕金森病发病机制,尤其是帕金森病炎性机制。因此,本论文重点研究小胶质细胞自噬对α-突触核蛋白诱导的神经炎症的调控作用与分子机制。研究方法:本论文以C57BL/6小鼠原代小胶质细胞及BV2细胞株为研究对象。以不同浓度（2.5、5和10mg/ml）人源重组α-synuclein蛋白单体作用于BV2或原代培养的小胶质细胞中,在不同时间点（1h、3h、6h）通过免疫印迹测定LC3II、P62、Beclin1和mTOR等自噬相关蛋白及调控分子的表达变化,通过荧光显微镜计数LC3点的变化;收集培养48h后的过表达野生型α-synuclein蛋白的PC12细胞上清,将其转移到BV2或原代小胶质细胞中,以上述类似方法研究细胞自噬和自噬流量的变化,验证α-synuclein对小胶质细胞内自噬活性的影响。通过给予溶酶体抑制剂Baf A1或自噬激动剂Rapamycin探究α-synuclein调控自噬的分子机制。以自噬相关基因Atg5 siRN...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AMPK/mTOR通路介导α-synuclein对自噬的抑制作用图A.免疫印迹测定α-synuclein条件培养基作用BV2细胞24h内ATG5、ATG7及Beclin1表
图 5：小胶质细胞自噬调控神经炎症反应图 A-B. 免疫印迹测定 TLR4/NFκ B 通路蛋白及炎症小体 NLRP3 蛋白表达，α -synuclein 激活 TLR4/NFκ B 通路及NLRP3的形成,n=4；图C-E. Q-PCR 及ELISA 检测炎症因子表达水平，n=3-5；图 F. 免疫印迹测定调控自噬 NLRP3 蛋白水平。n=3-5.One way ANOVA.*P<0.05，**P<0.01***P<0.001.6. 小胶质细胞自噬调控细胞吞噬能力研究表明，α-synuclein 激活小胶质细胞主要通过表面受体分子如 CD36、TLRs、MHCII 等，其一通过受体偶联的信号通路激活小胶质细胞、诱导炎症相关分子的生成与释放，其二是识别结合并介导 α-synuclein 被吞噬。那么小胶质细胞自噬是否影响其吞噬能力呢？本论文使用小胶质细胞吞噬荧光微球的数量来判定其吞噬能力，首先我们利用自噬诱导剂 Rapamycin 以及 siRNA 敲减 atg5，以增
本文编号：3386106
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AMPK/mTOR通路介导α-synuclein对自噬的抑制作用图A.免疫印迹测定α-synuclein条件培养基作用BV2细胞24h内ATG5、ATG7及Beclin1表
图 5：小胶质细胞自噬调控神经炎症反应图 A-B. 免疫印迹测定 TLR4/NFκ B 通路蛋白及炎症小体 NLRP3 蛋白表达，α -synuclein 激活 TLR4/NFκ B 通路及NLRP3的形成,n=4；图C-E. Q-PCR 及ELISA 检测炎症因子表达水平，n=3-5；图 F. 免疫印迹测定调控自噬 NLRP3 蛋白水平。n=3-5.One way ANOVA.*P<0.05，**P<0.01***P<0.001.6. 小胶质细胞自噬调控细胞吞噬能力研究表明，α-synuclein 激活小胶质细胞主要通过表面受体分子如 CD36、TLRs、MHCII 等，其一通过受体偶联的信号通路激活小胶质细胞、诱导炎症相关分子的生成与释放，其二是识别结合并介导 α-synuclein 被吞噬。那么小胶质细胞自噬是否影响其吞噬能力呢？本论文使用小胶质细胞吞噬荧光微球的数量来判定其吞噬能力，首先我们利用自噬诱导剂 Rapamycin 以及 siRNA 敲减 atg5，以增
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