阻断SHH信号通路对胶质细胞炎性激活的实验研究

发布时间：2021-09-08 14:34

　　本实验应用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导恶性胶质瘤细胞系LN229细胞株建立胶质细胞炎性激活的模型，观察在SHH通路阻断剂cyclopamine阻断SHH通路的情况下，LN229细胞激活及炎症因子的表达。并一步观察LPS刺激下阻断SHH通路对胶质-神经元共培养下神经细胞的保护作用。最后观察LPS刺激下阻断SHH通路对LN229细胞帕金森相关基因Nurr1的表达的影响，为临床上治疗帕金森病提供新策略。本实验分三部分：第一部分LN229细胞炎症激活模型的建立及阻断SHH通路对炎症因子表达的影响目的：应用LPS刺激LN229细胞，建立胶质细胞激活的细胞模型，在此基础上探讨cyclopamine阻断SHH通路对胶质激活的影响。方法：运用CCK-8法检测所用浓度LPS及cyclopamine对LN229的细胞毒性；实时荧光定量PCR检测不同时间点LPS诱导下IL-1β mRNA的表达变化以确定LPS使用浓度。根据以上实验结果运用LPS刺激LN229细胞建立胶质细胞激活模型，实时荧光定量PCR检测炎症因子iNOS、TNFα、IL-1β及胶质细胞激活相关基因caspas... 

【文章来源】：广州医科大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照表
前言
第一部分 LN229细胞炎症激活模型的建立及阻断SHH通路对炎症因子表达的影响
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验主要试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 主要试剂的配制
        1.5 PCR引物
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞处理及分组
        2.3 CCK-8法检测细胞存活
        2.4 实时荧光定量PCR
    结果
        1. LPS对LN229细胞的毒性
        2. cyclopamine对LN229细胞的毒性
        3. LPS刺激LN229细胞的作用时间
        4. LPS刺激下LN229细胞炎症因子的表达
        5. LPS对LN229细胞caspase8、caspase3表达的影响
        6. LPS对LN229细胞SHH信号通路的激活
        7. cyclopamine增加LPS诱导下LN229细胞炎症因子的表达
第二部分 阻断SHH通路增强LPS诱导下神经细胞的损害
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验主要试剂
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞处理及分组
        2.3 CCK-8法检测细胞存活
    结果
        1. LPS对神经细胞的毒性
        2. Cyclopamine对神经细胞的毒性
第三部分 cyclopamine对脂多糖诱导下LN229细胞中帕金森病相关基因Nurr1的表达的影响
    1. 实验材料
    2. 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞处理和分组
        2.3 实时荧光定量PCR
        2.4 细胞总蛋白的提取
        2.5 蛋白浓度测定
        2.6 免疫印迹法检测蛋白含量
    结果
        1. LPS刺激下LN229细胞Nurr1的表达
        2. Cyclopamine对LN229细胞Nurr1表达的影响
讨论
结论
参考文献
综述：Sonic hedgehog信号通路在帕金森病中的研究进展
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Sonic Hedgehog蛋白在帕金森病模型大鼠黑质中的表达[J]. 何穗芬,董为人,郝彦利,龙大宏,孙卫文,王富强,王海红,郭家松,宋建武,陈英华.  解剖学研究. 2008(05)



本文编号：3390960