正常DMPK基因CTG序列多态性初探及强直性肌营养不良1型microRNA表达谱的生物信息学分析

发布时间：2021-09-09 07:30

　　目的：1.初步分析正常DMPK等位基因CTG序列拷贝数的分布特点，丰富对中国汉族人CTG序列多态性的认识。2.基于芯片平台筛选强直性肌营养不良1型患者肌肉组织中异常表达的microRNA和基因，通过生物信息学方法分析差异microRNA与差异基因间的相互作用关系，探索microRNA在DM1中参与的重要功能和通路，为阐明microRNA在DM1发病机制中的作用提供更直接的科学依据。方法:1.采用三重引物PCR（triplet primed PCR, TP-PCR）对53名临床拟诊为DM1的患者及8名无症状亲属行基因诊断，分析正常DMPK等位基因CTG拷贝数的分布趋势。2.选取4例来自DM1患者的活检肌肉标本为实验组，4例来自骨科手术病人的正常肌肉标本为对照组，通过RNA提取、microRNA芯片和全转录本芯片检测，筛选出两组间的差异microRNA和差异基因；利用TargetScan6.2预测差异microRNA的靶基因，并对差异基因进行功能及信号通路的显著性分析；将显著性功能和信号通路所对应的差异基因与靶基因进行对比，找出交集基因，探索其与microRNA间的相互作用关系。结果:1.... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DM1的RNA毒性致病机制

推动 microRNA 研究的飞速发展做出了巨大的icroRNA 有 1600 个前体和 2042 个成熟体(m合成包括 microRNA 基因的转录、核内加工、程。首先，microRNA 基因在 RNA 聚合酶Ⅱ物(pri-microRNA)，然后在 Drosha/DCGR8 作t、含有茎环结构的前体 microRNA(pre-microRP 转运出细胞核，经过 Dicer 的第二次剪切产些成熟 microRNA 可与其他蛋白质一起组成 ilencing complex, RISC)，通过核酸序列互补结 种机制负向调控基因表达：当 microRNA 和靶，靶基因 mRNA 降解；当不完全互补时，则RNA 的水平(图 1-2)。

图 2-1 反应二原理图表 1-2 TP-PCR 反应程序[1, 2]应步骤 温度(℃) 时间(秒) 循环变性 94 240 1变性 95 60退火 60 603延伸 72 120末延伸 72 600 1离检测：PCR 产物使用 ABI 公司的 3100 测序仪进行后续处理。峰出现在 60-63 碱基处，最大片段长度峰不超过 160 碱基(图 2


本文编号：3391687