PCBP1对帕金森病大鼠模型的影响

发布时间：2021-09-12 18:56

　　目的：为了明确poly （rC）-结合蛋白1（poly （rC） binding protein1, PCBP1）是否参与帕金森病（parkinson’s disease, PD）的病理进程,本研究利用6-OHDA损伤大鼠纹状体的PD模型,通过腺相关病毒（rAAV）将PCBP1重组质粒转染大鼠神经元细胞内表达,探讨在帕金森病发生过程中与PCBP1可能存在的关系以及PCBP1对神经元的调节和保护作用。旨在为临床运用基因治疗PD提供可靠的理论基础,并为PD的治疗发现潜在的靶点和新的思路。材料与方法：SD雄性大鼠（200—250g）,用6-OHDA注射纹状体双侧损伤的PD大鼠模型,随机分为6-OHDA损伤组,6-OHDA+PCBP1腺相关病毒治疗组和空病毒对照组。治疗组在rAAV2-PCBP1-EGFP注射左侧纹状体手术一周后于双侧纹状体注射6-OHDA24ug。一周后开始每周一次的行为学检测,连续检测六周。6-OHDA注射第七周时迅速处死动物。对照组在相同时间检测行为和取材。1.用旋转行为测转仪检测不同剂量6-OHDA对由阿扑吗啡（Apomorphin Apo）诱发的大鼠异常旋转行为；2.... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 帕金森病大鼠模型的建立及6-OHDA损伤剂量筛选
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 药品与试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2. 方法
        1.2.1 主要溶液配制
        1.2.2 动物分组及处理
        1.2.3 数据处理和统计学检验
    1.3 结果
        1.3.1 6-OHDA注射纹状体出现由APO诱发的偏侧旋转行为
        1.3.2 6-OHDA注射纹状体导致黑质DA能神经元渐进性缺失
    1.4 讨论
        1.4.1 6-OHDA注射纹状体制备的PD大鼠模型的选择及其可能的机制
        1.4.2 6-OHDA注射纹状对黑质DA能神经元的影响
        1.4.3 阿扑吗啡诱发大鼠产生旋转行为的机制和结果分析
        1.4.4 6-OHDA注射纹状体对黑质DA能神经元数目的影响
第二部分 pSNAV1.0-pCBP1的构建
    2.1. 实验材料
        2.1.1 药品与试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 从pcDNA4c-PCBP1质粒上获得目的基因
        2.2.2 产物纯化
        2.2.3 纯化产物酶切
        2.2.4 pSNAV1.0质粒的扩增
        2.2.5 连接构建成pSNAV1.0-pCBP1
        2.2.6 所得pSNAV1.0-pCBP1重组质粒产物测序
    2.3 结果
        2.3.1 PCBP1目的条带的扩增pcDNA 4c-PCBP1
        2.3.2 pSNAVl.0酶切产物鉴定
        2.3.3 连接产物转化大肠杆菌DH5 α后进行克隆筛选
        2.3.4 pSNAV1.0-PCBP1重组质粒酶切鉴定
        2.3.5 pSNAV1.0-pCBP1重组质粒测序
    2.4 讨论
第三部分 rAAV2-PCBP1-EGFP病毒包装
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 载体细胞株的建立
        3.2.2 rAAV2-PCBP1-EGFP的大规模制备
        3.2.3 rAAV2-PCBP1-EGFP的纯化及纯度检测
        3.2.4 rAAV2-PCBP1-EGFP的目的基因的PCR鉴定
        3.2.5 rAAV2-PCBP1-EGFP的滴度测定
        3.2.6 滴度测定样品处理
        3.2.7 阳性对照质粒的处理
    3.3 结果
        3.3.1 rAAV2-PCBP1-EGFP经负染后用电子显微镜观察
        3.3.2 rAAV2-PCBP1-EGFP的目的基因的PCR鉴定
        3.3.3 rAAV2-PCBP1-EGFP的滴度测定
    3.4 讨论
第四部分 PCBP1对帕金森大鼠的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 行为学测试TRUSCAN
        4.1.2 免疫组化
        4.1.3 western
    4.2 实验方法
        4.2.1 rAAV2-PCBP1-EGFP表达时效和剂量的摸定
        4.2.2 rAAV2-PCBP1-EGFP注射纹状体对帕金森大鼠的治疗效应
    4.3. 结果
        4.3.1 rAAV2-PCBP1-EGFP 表达时效和剂量
        4.3.2 行为学测试结果
        4.3.3 rAAV2-PCBP1-EGFP注射纹状体后大鼠脑内PCBP1的表达
        4.3.4 Western-blot检测中脑中TH,HSP70
    4.4 讨论
        4.4.1 rAAV2-PCBP1-EGFP在大鼠脑内的表达
        4.4.2 模型的建立原则
        4.4.3 rAAV2-PCBP1-EGFP对PD大鼠行为的影响
        4.4.4 PCBP1的表达量的变化以及rAAV2-PCBP1-EGFP对HSP70的上调作用
结论
附录：文章缩略词一览表
参考文献
文献综述
    参考文献
个人简历
致谢
硕士期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3394767