DNMT1和MBD1对P19细胞DNA甲基化动力学影响的研究
发布时间：2021-09-22 17:17
目的:研究DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferases1,DNMT1）和甲基化-Cp G-结构域结合蛋白1（Methyl-Cp G-binding Domain protein 1,MBD1）对P19中DNA甲基化的动力学的影响。方法:（1）培养P19细胞,然后将携带MBD1短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）#2号慢病毒载体和Scramble（无意义）sh RNA转染到P19细胞中,给予嘌呤霉素（puromycin）筛选出已感染的细胞;利用荧光显微镜、qPCR验证慢病毒载体对P19细胞MBD1敲减效率。（2）用MTT法检测给予不同浓度（2.5、5、10、20和40μmol/L）的5-氮杂胞苷（5-Azacytidine,5-Aza）在24h、48h、72h对P19细胞的抑制率,筛选出最佳的5-Aza浓度,并利用qPCR和Western blotting筛选出最佳的作用时间。培养5-Aza处理的P19细胞,然后利用qPCR和Western blotting检测MBD1、DNMT1、DNA甲基转移酶3a（DNA methyltransfer...
【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA甲基化动力学
图 3 P19 细胞感染慢病毒（Scramble、#2）荧光图（100×）左：普光；右：荧光. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (1 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the sam验 MBD1 shRNA 慢病毒载体对 MBD1 的敲减率果显示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 细胞后，Scrambl著性差异（P>0.05），表明慢病毒本身对 P19 细胞 MBD1；#2 组与 Scramble 组相比，MBD1 mRNA 水平降低，差1），#2 号病毒的 MBD1 敲减率可达 83.14%（Fig. 4）。
图 3 P19 细胞感染慢病毒（Scramble、#2）荧光图（100×）左：普光；右：荧光Figure 3. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (100 ×)Left: P19 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the same view2.1.2 qPCR 检验 MBD1 shRNA 慢病毒载体对 MBD1 的敲减率qPCR 结果显示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 细胞后，Scramble 组与对照组相比，无显著性差异（P>0.05），表明慢病毒本身对 P19 细胞 MBD1 mRNA 水平无明显影响；#2 组与 Scramble 组相比，MBD1 mRNA 水平降低，差异具有显著性（P<0.01），#2 号病毒的 MBD1 敲减率可达 83.14%（Fig. 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanism of noradrenaline during the stress-induced major depressive disorder[J]. Kenjiro Seki,Satomi Yoshida,Manoj Kumar Jaiswal. Neural Regeneration Research. 2018(07)
[2]Stem cells:a promising candidate to treat neurological disorders[J]. Chang-Geng Song,Yi-Zhe Zhang,Hai-Ning Wu,Xiu-Li Cao,Chen-Jun Guo,Yong-Qiang Li,Min-Hua Zheng,Hua Han. Neural Regeneration Research. 2018(07)
本文编号：3404104
【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA甲基化动力学
图 3 P19 细胞感染慢病毒（Scramble、#2）荧光图（100×）左：普光；右：荧光. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (1 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the sam验 MBD1 shRNA 慢病毒载体对 MBD1 的敲减率果显示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 细胞后，Scrambl著性差异（P>0.05），表明慢病毒本身对 P19 细胞 MBD1；#2 组与 Scramble 组相比，MBD1 mRNA 水平降低，差1），#2 号病毒的 MBD1 敲减率可达 83.14%（Fig. 4）。
图 3 P19 细胞感染慢病毒（Scramble、#2）荧光图（100×）左：普光；右：荧光Figure 3. P19 cells infected with lentivirus (Scramble, #2) fluorescence map (100 ×)Left: P19 cells in bright field; Right: Expressing of GFP in P19 cells in the same view2.1.2 qPCR 检验 MBD1 shRNA 慢病毒载体对 MBD1 的敲减率qPCR 结果显示，Scramble、#2 慢病毒感染 P19 细胞后，Scramble 组与对照组相比，无显著性差异（P>0.05），表明慢病毒本身对 P19 细胞 MBD1 mRNA 水平无明显影响；#2 组与 Scramble 组相比，MBD1 mRNA 水平降低，差异具有显著性（P<0.01），#2 号病毒的 MBD1 敲减率可达 83.14%（Fig. 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanism of noradrenaline during the stress-induced major depressive disorder[J]. Kenjiro Seki,Satomi Yoshida,Manoj Kumar Jaiswal. Neural Regeneration Research. 2018(07)
[2]Stem cells:a promising candidate to treat neurological disorders[J]. Chang-Geng Song,Yi-Zhe Zhang,Hai-Ning Wu,Xiu-Li Cao,Chen-Jun Guo,Yong-Qiang Li,Min-Hua Zheng,Hua Han. Neural Regeneration Research. 2018(07)
本文编号：3404104
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