PINK1基因通过线粒体分裂融合途径对脑缺血的神经保护作用

发布时间：2021-09-30 03:29

　　近期有研究表明,线粒体分裂融合途径在缺血性神经元的损伤中扮演重要角色。我们的前期研究结果也表明,在缺血性刺激后,神经元内线粒体存在明显的过度断裂现象。而PINK1作为家族性帕金森病的致病基因,目前已有较多文献报导其参与了线粒体的分裂和融合过程,在哺乳动物细胞内,PINK1（PTEN-induced putative kinase1）基因敲除可以诱导线粒体分裂以及片段化。为了探索PINK1在缺血性神经损伤中的作用,及其对缺血后神经元线粒体功能的影响。我们制备了氧糖剥夺（OGD）损伤的神经元模型,并采用慢病毒表达体系过表达野生型PINK1或其突变型L347p和W437x。并采用慢病毒介导的Pinkl-shRNA抑制内源性Pink1的表达。研究结果表明,PINKl能够明显减少改善OGD诱导细胞死亡、改善OGD后线粒体的形态和功能、减轻OGD后线粒体膜电位的衰减和能量代谢障碍。其保护作用可能是通过PINK1抑制了OGD诱导的线粒体分裂蛋白Drp1从胞浆向线粒体的细胞内转位,从而重建了线粒体分裂和融合的平衡有关。研究提示,PINK1可以通过抑制缺血性损伤诱导的线粒体分裂,从而达到改善线粒体功能和... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

神经元鉴定免疫组化图

对细胞核进行染色，以GFP阳性细胞占Hochest 33342染色细胞的比例来进行细胞感染率鉴定。结果显示，90%以上的细胞被慢病毒所感染(图1-2A、B)。22

图1-3 PINKl过表达慢病毒载体表达A： Western Blot检测慢病毒感染后PIMCl蛋白表达 B: q-PCR对PINK1的mRNA检测，慢病毒感染细胞后，细胞PINK1 mRNA达水平显著提高，与对照相比，mRNA的表达水平上升了 5倍2.3 Pinkl -shRNA慢病毒载体的构建和表达原代神经元培养7-10天后，采用包含有Pinkl-shRNA质粒的慢病毒载体感染细胞，并采用含有不与任何基因序列有相互作用的Scramble—ShRNA作为对照。在细胞感染后48h，抽取细胞总RNA，q-PCR对细胞Pinkl的mRNA水平进行检测。结果提示，与Scramble-shRNA组相比，Pinkl-shRNA能够显著降低内源性Pinkl的表达，其抑制效果大于80% (图1-4)。< 0.005-1

【参考文献】：
期刊论文
[1]PINK1基因突变增强帕金森病相关毒物神经毒性作用的线粒体机制[J]. 方堃,董强,崔梅.  神经损伤与功能重建. 2012(03)



本文编号：3415035