CREB-shRNA对氧糖剥夺/复氧皮层神经元线粒体形态和凋亡的影响

发布时间：2021-10-04 22:50

　　目的:探讨沉默CREB基因对氧糖剥夺/复氧神经元线粒体形态及细胞凋亡的影响。方法:3条靶向CREB基因的shRNA片段插入慢病毒载体pLenti Lox3.7（PLL）,与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞包装病毒颗粒后感染原代皮层神经元,Western blot检测CREB蛋白的沉默情况;分别用Mito Tracker red、TUNEL和Western blot实验检测氧糖剥夺/复氧诱导CREB基因沉默后神经元的线粒体形态、细胞凋亡和Bcl-2、Bax的表达情况。结果:pLL-CREB-shRNA1为最有效的shRNA,其抑制皮层神经元CREB基因表达率高达80%。CREB基因沉默促进氧糖剥夺/复氧诱导的皮层神经元线粒体向点状、片段化形态改变,同时降低Bcl-2表达、促进Bax的表达并加重细胞凋亡（P<0.05）。结论:CREB-shRNA重组慢病毒载体可特异性抑制神经元CREB基因的表达,CREB基因沉默加重氧糖剥夺/复氧诱导的皮层神经元线粒体形态改变,促进细胞凋亡。 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2017,33(08)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【图文】：

pLL-CＲEB-shＲNA1对OGD/Ｒ诱导的皮层神经元Bcl-2和Bax表达的影响

Figure6．TheexpressionofBcl-2andBaxincorticalneuronstransfectedwithpLL-CＲEB-shＲNA1．Mean±SD．n=3．*P＜0.05，＊＊P＜0.01vscontrolgroup;#P＜0.05，##P＜0.01vsOGD/Ｒgroup．图6pLL-CＲEB-shＲNA1对OGD/Ｒ诱导的皮层神经元Bcl-2和Bax表达的影响质内，确保氧化磷酸化过程顺利进行，从而生成细胞所需的能量分子ATP;而在环境胁迫及凋亡的状态下，线粒体的形态结构即改变为点状，且在胞质内不规则分布，从而降低ATP的生成。本研究表明，氧糖剥夺/复氧处理原代皮层神经元发现细胞内线粒体由管状、网状的形态结构转变为点状、片状形态，与缺血再灌注诱导的神经元线粒体形态的改变一致。原代皮层神经元由于其自身的生长特点、能量需求与产生的特殊性以及对营养元素的独特要求决定其在体外培养的情况下对转染的不敏感性，常用的脂质体转染，转染效率极低且影响神经元的活性。慢病毒载体具有可转染非分裂细胞、目的基因表达时间长以及无免疫排斥反应等优点而使其成为转染神经元最有效的转染系统［15］。本研究构建的CＲEBＲNA干扰慢病毒载体转染皮层神经元，结果显示，转染后CＲEB基因表达被抑制效率可达到80%以上，充分说明慢病毒载体系统在转染原代神经元方面的优势。CＲEB作为细胞内重要的转录因子，在维护神经元功能方面发挥重要的作用，如参与记忆形成与维持、神经再生和突触的形成等［16-17］。本研究显示，CＲEBＲNA干扰重组慢病毒载体转染加重氧糖剥夺/复氧诱导皮层神经元线粒体的形态向点状变化，并降低线粒体的质量体积和PGC-1α的表达，说明CＲEB基因表达的抑制影响氧糖剥夺/复氧情况下线粒体的形态结构，且降低线粒体的生成，进一步促进线粒体形态结构的改变。正常情况下，Bax定位于胞质内，

【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体生成与脑缺血再灌注损伤的研究进展[J]. 王来,祝世功.  中国病理生理杂志. 2016(08)
[2]大豆异黄酮对脑缺血/再灌注诱导的线粒体损伤和脑细胞凋亡的影响[J]. 赵士弟,陈耀,姜丽娜,董银凤,陈前芬.  中国病理生理杂志. 2014(12)
[3]靶向大鼠Smad3基因的siRNA筛选及其shRNA重组慢病毒的构建[J]. 陈鹏,郑素军,王世美,张建军,邢欣悦,张莹,刘梅,段钟平.  临床肝胆病杂志. 2011(05)



本文编号：3418489