MicroRNA-148a通过靶向调控DYNLL2促进神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭

发布时间：2021-10-07 19:38

　　目的:研究mir-148a通过靶向调控重组人动力蛋白轻链LC8 type 2（Recombinant Human Dynein Light Chain LC8 Type-2,DYNLL2）对神经胶质瘤（GBM）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:1、运用生物信息学方法筛选预测mir-148a可能的靶基因。用常用的miRNA靶基因专业的预测软件如microrna.org、TargetScan、miRBase筛选出mir-148a的潜在靶基因,将三种软件预测结果重复率高的基因作为候选基因。2、用qRT-PCR和Western Blot方法检测DYNLL2在神经胶质细胞与胶质瘤细胞中的表达水平,观察mir-148a是否影响DYNLL2的表达。比较DYNLL2基因在正常神经胶质细胞与胶质瘤细胞中的表达差异性;同时,在神经胶质瘤细胞中,观察mir-148a过表达与抑制表达是否影响mir-148a的表达水平。3、运用双荧光素报告酶基因实验验证DYNLL2是否为mir-148a靶基因。制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒,将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,采用双荧光素酶... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DYNLL2在神经胶质瘤细胞系miR-148a过表达组与对照组中的表达与对照pre-miRNA转染细胞比较;场<0.05,

３．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达水平结果??分别在正常的神经胶质细胞以及胶质瘤细胞进行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ实验，根据实??验结果可知，ＤＹＮＬＬ２的蛋白水平在正常胶质细胞中的表达量高于胶质瘤细胞系??中的表达。各胶质瘤细胞组与正常胶质细胞组之间的表达差异具有统计学意义（Ｐ??＜０．０５），见图５。为了进一步验证ＤＹＮＬＬ２是ｍｉｒ－１４８ａ的一个真实祀基因，我们??在ｍｉｒ－１４８ａ过表达的神经胶质瘤细胞与抑制表达的祌经胶质瘤细胞中分别进行??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ实验检测ＤＹＮＬＬ２在蛋白质翻译水平的验证，由实验结果得知，在??神经胶质瘤细胞中过表达ｍｉｒ－１４８ａ之后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达量相对于对照组要??低，而在神经胶质瘤细胞中抑制表达ｍｉｒ－１４８ａ后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达量要高于??对照组，这种表达差异具有统计学意义（ＰＣ０．０５），见图６、图７。??４?－??

??３．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达水平结果??分别在正常的神经胶质细胞以及胶质瘤细胞进行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ实验，根据实??验结果可知，ＤＹＮＬＬ２的蛋白水平在正常胶质细胞中的表达量高于胶质瘤细胞系??中的表达。各胶质瘤细胞组与正常胶质细胞组之间的表达差异具有统计学意义（Ｐ??＜０．０５），见图５。为了进一步验证ＤＹＮＬＬ２是ｍｉｒ－１４８ａ的一个真实祀基因，我们??在ｍｉｒ－１４８ａ过表达的神经胶质瘤细胞与抑制表达的祌经胶质瘤细胞中分别进行??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ实验检测ＤＹＮＬＬ２在蛋白质翻译水平的验证，由实验结果得知，在??神经胶质瘤细胞中过表达ｍｉｒ－１４８ａ之后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达量相对于对照组要??低，而在神经胶质瘤细胞中抑制表达ｍｉｒ－１４８ａ后，ＤＹＮＬＬ２的蛋白表达量要高于??对照组，这种表达差异具有统计学意义（ＰＣ０．０５），见图６、图７。??４?－??


本文编号：3422648