BACH2与FUS互作通Linc00589/miR-10b-5p/WWC3途径调控胶质瘤细胞生物学行为的机制研究

发布时间：2021-10-20 07:33

　　目的:脑胶质瘤是人类中枢神经系统中常见的恶性肿瘤,预后较差,目前的治疗选择有限。因此,深入研究胶质瘤细胞的生物学行为及其相关机制,对于寻找更有效治的疗恶性脑胶质瘤的新“靶标”具有重要意义。本文旨在研究转录因子BACH2与RNA结合蛋白FUS之间的相互作用对于调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为的影响,并进一步深入研究其潜在的分子机制,即BACH2与FUS互作是否通过增强其对Linc00589的转录抑制作用下调Linc00589的表达,从而减弱Linc00589对microRNA（miR）-10b-5p RISC依赖的负性调控作用,进而增强miR-10b-5p与WWC3的3’UTR结合降低WWC3的表达,阻断Hippo信号通路,促进胶质瘤细胞恶性生物学行为。研究方法:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测神经胶质瘤组织和细胞中BACH2,FUS,Linc00589,miR-10b-5p,WWC3的内源性表达水平。为了研究BACH2和FUS相互作用的分子机制及其对神经胶质瘤细胞恶性行为的影响,建立了稳定表达沉默BACH2,FUS,过表达Linc00589,过表达及沉默miR-10b-5p和过表达及... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

BACH2、FUS内源性表达及对胶质瘤细胞生物学行为的影响。

本研究进一步采用免疫荧光实验观察BACH2与FUS在胶质瘤细胞中的定位,结果如图2A所示:代表BACH2的绿色荧光和代表FUS的红色荧光富集于细胞质及细胞核,融合图像的细胞核中可见BACH2与FUS的共同定位。为明确二者是否存在相互作用,采用GST-Pulldown实验结果如图2B所示:与阴性对照GST+His-FUS组相比,GST-BACH2+His-FUS组可检测出二者的结合,进而应用CO-IP实验进一步验证了二者在体内的结合作用(图2C)。3.3 Linc00589 在胶质瘤组织和细胞中低表达,过表达Linc00589 抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

应qRT-PCR方法检测Linc00589在正常脑组织与不同级别胶质瘤组织,以及HA细胞与U87、U251细胞中表达。结果显示与正常脑组织相比,Linc00589在胶质瘤组织中表达显著降低,且表达水平随胶质瘤组织病理级别增加而降低(图3A),在U87与U251细胞中Linc00589表达显著低于HA细胞(图3B)。在U87、U251细胞中稳定转染过表达Linc00589,检测细胞生物学行为的变化。结果显示:与Linc00589(+)-NC组相比,Linc00589(+)组胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭能力均显著减弱(图3C,D),凋亡率显著升高(图3E)。3.4 沉默BACH2 抑制Linc00589 的转录,进而抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为


本文编号：3446507