血管紧张素Ⅱ2型受体活化对PC12细胞缺氧/再供氧损伤的作用及机制

发布时间：2021-11-03 17:36

　　缺血性脑血管病是一种常见的脑血管病,致残和致死率高,且在治疗过程中容易造成中枢神经系统缺氧/再灌注损伤。研究发现,血管紧张素Ⅱ2型受体（AngiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R）能影响正常的神经可塑性和学习记忆等认知功能;可舒张血管,调节细胞生长发育,促进细胞增殖和分化,参与组织结构的修复和重塑;可通过促进侧枝循环开放,改善脑血液循环,对缺血性脑损伤起保护作用。目前,AT2R活化在神经细胞缺血/再灌注损伤中的具体作用及机制尚不清楚。本研究旨在探讨AT2R活化对缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响及初步机制。PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株,具有神经内分泌细胞的一般特征,被广泛应用于神经生理学等相关领域的研究。本研究采用含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基,于37℃、5%CO2恒温培养箱中培养PC12细胞16²4h,当细胞密度达80-90%时,弃去培养液,无菌PBS洗三次,用含化学性缺氧剂连二亚硫酸钠（Na2S2O4）的无糖无血清培养基孵育1小时,再更换新鲜10%胎牛血清高糖DMEM培养基,复制缺血/再灌注损伤的神经细胞模型。缺... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
第二章 实验材料
    2.1 主要实验仪器
    2.2 细胞株
        2.2.1 主要试剂盒
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 其他
第三章 实验方法
    3.1 药品及试剂配制方法
        3.1.1 磷酸缓冲盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）的配制
        3.1.2 100nmol/L PD123319的配制
        3.1.3 100nmol/L CGP42112的配制
        3.1.4 5mg/ml噻唑蓝（MTT）的配制
        3.1.5 30%凝胶储备液的配制
        3.1.6 1mol/L三羟甲基氨基甲烷[Tris（hydroxymethyl）aminomethane，Tris]（PH 6.8）的配制
        3.1.7 1.5mol/L Tris-HCl（p H 8.8）的配制
        3.1.8 10%十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate，SDS）的配制
        3.1.9 10%过硫酸铵的配制
        3.1.10 膜转移缓冲液的配制
        3.1.11 5 × 聚丙烯酰胺凝胶 （ sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）电泳缓冲液的配制
        3.1.12 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris Buffered Salinewith Tween-20，TBST）的配制
        3.1.13 封闭缓冲液的配制
        3.1.14 考马斯亮蓝染色液的配制
        3.1.15 蛋白裂解液的配制
        3.1.16 4%台盼蓝母液的配制
    3.2 PC12细胞的体外培养与传代
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 细胞传代
        3.2.3 细胞冻存
        3.2.4 细胞计数
    3.3 缺氧/再供氧损伤细胞模型的建立
    3.4 台盼蓝染色法观察细胞活力变化
    3.5 MTT比色法检测细胞存活率
    3.6 Western blot免疫印迹
        3.6.1 总蛋白提取
        3.6.2 BCA检测蛋白浓度
        3.6.3 SDS-PAGE电泳
    3.7 反转录PCR
        3.7.1 目的基因引物的合成
        3.7.2 RNA提取
        3.7.3 RNA质量检测及浓度测定
        3.7.4 第一链c DNA合成
        3.7.5 PCR
        3.7.6 RNA琼脂糖电泳
    3.8 图像分析及统计学方法
第四章 实验结果
    4.1 建立缺氧/再供氧损伤细胞模型
        4.1.1 Na2S2O4对PC12细胞存活率的影响
        4.1.2 台盼蓝染色观察细胞活力变化
    4.2 AT2R对缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
        4.2.1 AT2R激动剂对缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
        4.2.2 AT2R抑制剂对缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
    4.3 P38MAPK抑制剂对AT2R诱导缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
        4.3.1 P38MAPK抑制剂对缺氧/再供氧损伤PC12细胞中P38MAPK磷酸化的影响
        4.3.2 P38MAPK抑制剂对AT2R诱导缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
        4.3.3 P38MAPK抑制剂对缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长中Bcl-2、Bax表达的影响
    4.4 台盼蓝染色法观察P38MAPK抑制剂对AT2R诱导缺氧/再供氧损伤PC12细胞生长的影响
第五章 讨论
第六章 结论
参考文献
综述 血管紧张素 2 型受体与缺血性脑卒中
    参考文献
攻读学位期间的科研成果
致谢
课题资助


【参考文献】：
期刊论文
[1]茶多酚对缺血-再灌注大鼠p38信号通路及细胞凋亡的影响[J]. 赵红霞,高滢.  陕西医学杂志. 2015(06)
[2]电针对Aβ25-35致阿尔茨海默病模型大鼠cAMP/PKA/CREB信号转导通路的影响[J]. 易显富,彭力,张泽月,肖敏,穆敬平,谢龙宇,陈筱诗,高翔,梁鹏飞.  中华实用诊断与治疗杂志. 2014(02)
[3]血管紧张素转换酶抑制剂联合血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病肾病肾功能临床疗效的Meta分析[J]. 韩素芳.  中国临床药理学与治疗学. 2012(11)
[4]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文编号：3474079