癫痫特异性iPS细胞的建立及其体外诱导分化为神经元的研究

发布时间：2021-11-03 20:17

　　癫痫是最常见的神经系统疾病之一,其发病机制非常复杂,至今尚未研究透彻。为了研究癫痫的发病机制,动物模型被广泛应用,但是动物模型的癫痫生理和人类不同,给应用带来了一定的限制。多能诱导干细胞（iPSCs）具备胚胎干细胞（ESCs）体外高度增殖和多向分化的能力,并且由患者成体细胞重编程获得的iPSC与供体保留着相同的遗传背景,同时解决了ESCs的来源问题,因此在再生医学和细胞替代治疗领域有着广泛的应用前景。目前,已经有将iPSCs技术应用于神经系统疾病的报道,特别是一些神经退行性疾病和神经发育异常性疾病,例如帕金森病、阿尔茨海默病和进行性脊髓性肌萎缩症等,但是将iPSCs技术应用于癫痫尚未见报道。不同类型的体细胞诱导分化为iPS细胞的效率有所不同,iPSCs也存在错误表达来源体细胞胚层的信息的风险,因此利用神经祖细胞获得iPSCs较为理想,但是利用神经外胚层细胞获得iPSCs的研究尚缺乏。本课题将分为三部分研究通过将癫痫患者来源的神经祖细胞重编程为特异性的iPSCs,这些细胞可以大量扩增,将其分化神经细胞后,我们通过分析其电生理特征,对候选的GABRG2基因进行分析,将这些具有特异性的iPS... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原代神经祖:.ffl胞A、培养15天形成的原代神经球50x;B、培养15天形成的原代神经球200>.

■Mm图2: iPS细胞的镜下观察A、原代iPS集落50X，转染第18天左右，原代iPS克隆幵始形成，镜下可见直径约为15um的有核细胞，细胞核较大，细胞与周围组织边界清晰，细胞周边有折光性较强的脂质小滴；B、第五代集落50X，培养至第五代iPS克隆时，可见形成的iPS细胞克隆边界更加清晰

我们取部分iPS细胞克隆进行碱性憐酸酶染色，由神经祖细胞和成纤维细胞来源的iPS细胞克隆均呈棕红色（图3)，说明获得的iPS细胞克隆处于未分化状态。而运用免疫劳光技术检测iPS细胞克隆，人未分化ES细胞特异性标志0CT4、S0X2、SSEA-4和TRA-1 -81等免疫劳光染色均呈高表达状态。；鐘：图3: iPS细胞第五代集落以及AP染色A、第五代集落200X (接种第一天)；B、第五代集落AKP染色50X ,两种组织来源的iPS细胞AP染色均呈现特征性的红色。Figure 3: iPS cells fifth-generation clones and AP staining. A，The fifth-generationclones 200x (The first day of inoculation) ； B, The AKP staining to the fifthgeneration clones 50x，two kinds of organizations source of iPS cells AP stainingshowed a characteristic red .4、畸胎瘤生成实验iPS注入小鼠肌肉中9周后，注射部位可见直径约2?4cin大小的肿块形成，成纤维细胞和祌经祖细胞来源的iPS细胞形成畸胎瘤的能力相仿。将其分离后，利用4%的多聚甲酵固定

【参考文献】：
期刊论文
[1]GABRG2基因多态性在GEFS+中分布的研究[J]. 孟海娇,洪震,朱国行,罗玉敏,任惠民.  神经疾病与精神卫生. 2003(06)



本文编号：3474284