TRPC5通过CAMMKβ/AMPKα/mTOR通路诱导自噬增强胶质瘤细胞耐药性
发布时间：2021-11-07 02:54
替莫唑胺（TMZ）是抗胶质母细胞瘤的首选化疗药物,但肿瘤对TMZ的化疗耐药性限制了其临床应用。尽管自噬被认为与化疗耐药及化疗下细胞存活的适应性应答相关,但其精确的分子机制仍不清楚。在本研究中,我们发现替莫唑胺增加TRPC5表达并上调基础自噬水平,而且神经胶质瘤细胞中自噬水平的上调是由TRPC5介导的。同时,TRPC5的敲除在体外和体内均上调胶质瘤细胞对化疗的敏感性。此外,我们采用TRPC5-siRNA和药物抑制证实CaMKKβ/AMPKα/mTOR通路在替莫唑胺治疗期间可介导自噬使细胞存活。而且具有替莫唑胺耐药性的U87细胞系保持着高基础自噬水平,而TRPC5敲除或是自噬被抑制的U87细胞系对替莫唑胺抗性降低。总之,我们的研究揭示了TRPC5可作为激活自噬的起始因子,通过CaMKKβ/AMPKα/mTOR途径上调胶质瘤细胞对TMZ的抗性,提示TRPC5可作为胶质瘤化疗中抗药性的新治疗靶点。
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMZ上调神经胶质瘤细胞中TRPC5的表达和自噬水平（A）用400nMTMZ处理神经胶质瘤U87/WT细胞48小时，通过免疫印迹分析TRPC5和LC3的蛋白质表达
12图 2.TRPC5 促进胶质瘤细胞中 TMZ 诱导的自噬（A）用 TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 转染 U87/WT 细胞 24 小时，然后用 TMZ 处理 48小时。通过 Fura-2 AM 法测定转染前后细胞内钙离子浓度。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋
南京医科大学硕士学位论文白水平表达。结果表明 TRPC5-siRNA 降低细胞内钙离子浓度及 LC3-II 的蛋白表达。（B）免疫荧光图像显示 TRPC5-siRNA 降低 U87/WT 细胞中平均每个细胞的 LC3 数量。（C）用TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 转染 U87/TMZ 细胞 24 小时，然后用 TMZ 处理 48 小时。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋白水平表达。结果表明 TRPC5-siRNA 降低 U87/TMZ 细胞 LC3-II的蛋白表达。（D 和 E）用 TRPC5 质粒转染 U87/WT 细胞，通过 Fura-2 AM 法测定转染前后细胞内钙离子浓度。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋白水平表达。结果表明 TRPC5 过表达上调细胞内钙离子浓度及 LC3-II 的蛋白表达。免疫荧光图像显示 TRPC5 过表达上调U87/WT 细胞中平均每个细胞的 LC3 数量。
本文编号：3481019
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TMZ上调神经胶质瘤细胞中TRPC5的表达和自噬水平（A）用400nMTMZ处理神经胶质瘤U87/WT细胞48小时，通过免疫印迹分析TRPC5和LC3的蛋白质表达
12图 2.TRPC5 促进胶质瘤细胞中 TMZ 诱导的自噬（A）用 TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 转染 U87/WT 细胞 24 小时，然后用 TMZ 处理 48小时。通过 Fura-2 AM 法测定转染前后细胞内钙离子浓度。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋
南京医科大学硕士学位论文白水平表达。结果表明 TRPC5-siRNA 降低细胞内钙离子浓度及 LC3-II 的蛋白表达。（B）免疫荧光图像显示 TRPC5-siRNA 降低 U87/WT 细胞中平均每个细胞的 LC3 数量。（C）用TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 转染 U87/TMZ 细胞 24 小时，然后用 TMZ 处理 48 小时。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋白水平表达。结果表明 TRPC5-siRNA 降低 U87/TMZ 细胞 LC3-II的蛋白表达。（D 和 E）用 TRPC5 质粒转染 U87/WT 细胞，通过 Fura-2 AM 法测定转染前后细胞内钙离子浓度。通过免疫印迹分析 LC3 的蛋白水平表达。结果表明 TRPC5 过表达上调细胞内钙离子浓度及 LC3-II 的蛋白表达。免疫荧光图像显示 TRPC5 过表达上调U87/WT 细胞中平均每个细胞的 LC3 数量。
本文编号：3481019
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