脑胶质瘤中MGMT表达与脑脊液中MGMT基因启动子甲基化的相关性研究

发布时间：2021-11-07 22:30

　　[研究目的]通过甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测法对脑胶质瘤患者脑脊液中6-O-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化进行检测,同时利用免疫组化技术检测胶质瘤患者肿瘤组织中的MGMT蛋白,探讨胶质瘤患者脑脊液中MGMT基因的甲基化状态和MGMT蛋白表达在胶质瘤组织中的关系,从而寻求一种间接反映胶质瘤组织中表达MGMT蛋白的指标,为制定胶质瘤患者个体化的化疗方案提供理论依据。[研究方法]收集云南省肿瘤医院2011年3月-2012年7月术前诊断疑似恶性胶质瘤患者的脑脊液,整理记录患者的临床病理资料,筛选出术后病理确诊为恶性胶质瘤患者的脑脊液,采用DNA提取试剂盒（DNeasy（?） Blood&Tissue69504）提取脑脊液DNA在验证人基因组DNA存在后,运用MSP技术检测脑脊液DNA中MGMT基因启动子甲基化的情况。同时选用10例脑梗患者的脑脊液标本做为恶性胶质瘤患者脑脊液标本的对照组,对检测结果进行统计学相关性分析。[研究结果]1.共提取脑脊液DNA55例,其中脑胶质瘤患者组、脑梗患者组各为45例和10例。2.脑胶质瘤患者组的肿瘤组织中的MGMT蛋白甲基... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
中英文对照表
中文摘要
Abstract
前言
一、脑胶质瘤中MGMT蛋白表的的检测
    1. 材料
        1.1 研究对象
            1.1.1 入选标准
            1.1.2 剔除标准
        1.2 主要实验试剂及试剂盒
        1.3 主要实验仪器
        1.4 实验技术路线图
        1.5 HE染色
        1.6 免疫组化
        1.7 免疫组化阳性结果判断
二、脑脊液DNA提取和亚硫酸氢盐修饰
    2. 材料
        2.1 研究对象
        2.2 主要实验试剂及试剂盒
        2.3 主要实验仪器
        2.4 提取脑脊液DNA主要实验步骤
        2.5 利用微量紫外分光光度计测量DNA的浓度和纯度
        2.6 运用0.7%琼脂糖凝胶电泳所提取的DNA判断其浓度及完整性
        2.7 DNA的重亚硫酸氢盐修饰
        2.8 结果
            2.8.1 人类基因组DNA的确认
三、检测脑脊液MGMT基因甲基化
    3. 材料
        3.1 研究对象
        3.2 主要实验试剂及试剂盒
        3.3 主要实验仪器
    4. 实验技术及方法
        4.1 MSP-PCR反应
        4.2 运用琼脂糖凝胶电泳后成像及结果判定
        4.3 临床资料采集及统计学分析
    5 结果
        5.1 恶性脑胶质瘤中MGMT蛋白表达与脑脊液中MGMT基因启动子甲基化状态的相关性分析
        5.2 恶性脑胶质瘤中MGMT蛋白表达与性别的关系
        5.3 恶性脑胶质瘤中MGMT蛋白表达与年龄的关系
        5.4 脑胶质瘤患者组的脑脊液MGMT基因启动子甲基化率与性别的关系
        5.5 脑胶质瘤患者组的脑脊液MGMT基因启动子甲基化率与年龄的关系
        5.6 脑梗患者组与脑胶质瘤患者组的脑脊液MGMT基因启动子甲基化率的关系
四、讨论
    1 胶质瘤的诊断
    2 胶质瘤的耐药机制及其调节
    3 胶质瘤肿瘤组织中MGMT蛋白的意义
    4 脑脊液中MGMT基因启动子甲基化的临床意义
    5 DNA甲基化的检测及方法的选择
    6 试验中遇到的问题及处理方式
五、结论
六、参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]神经胶质瘤的表观遗传学机制[J]. 王启琼,李银,杨学习.  分子诊断与治疗杂志. 2011(05)
[2]DNA修复相关基因启动子甲基化和肿瘤化疗耐药的进展[J]. 韩婧,李江.  上海交通大学学报(医学版). 2011(01)
[3]MGMT基因启动子甲基化检测在脑胶质瘤化疗中的意义[J]. 郑长青,季守平,宫锋,李安民,邰军利,章扬培.  癌症. 2009(06)
[4]MGMT及Topo Ⅱα在脑胶质瘤组织中的表达及意义[J]. 魏新亭,秦晋辉,杜伟,冯文献,孙科.  中国实用神经疾病杂志. 2008(12)
[5]脑胶质瘤循环标志物[J]. 林毅,江涛.  中国现代神经疾病杂志. 2008(05)
[6]人体游离循环DNA的研究进展[J]. 胡影,倪虹.  遗传. 2008(07)
[7]DNA甲基化研究方法的回顾与评价[J]. 顾婷婷,张忠明,郑鹏生.  中国妇幼健康研究. 2006(06)
[8]MGMT在神经胶质瘤中表达的临床意义及联合应用STZ对愈后的影响[J]. 胡苹,娄晋宁,章扬培,马雄君,赵奎明.  临床肿瘤学杂志. 2006(01)
[9]我国胶质瘤诊断治疗现状和努力方向[J]. 陈忠平,周旺宁.  中国肿瘤. 2005(02)
[10]人脑胶质瘤肿瘤标志物研究现状[J]. 王先祥,冯春国,李长元.  安徽医学. 2004(06)

硕士论文
[1]恶性胶质瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态及蛋白表达与患者临床预后的相关性研究[D]. 罗敏捷.南方医科大学 2012



本文编号：3482509