PDGF-BB对PD模型中神经细胞的保护作用及相关机制研究
发布时间：2021-11-14 04:46
帕金森疾病（Parkinson’s Disease,PD）是一种与年龄相关并且严重危害中老年人健康的神经性退行性疾病。该病以多巴胺能神经元渐进性变性脱失,纹状体多巴胺输入受损为主要病理特征。PD是一种多因素疾病,但具体机制仍待进一步阐明。因此,临床上仍采用对症治疗,如L-DOPA补充PD病人缺失的多巴胺。但是这种治疗方法并不能阻止疾病的进展且有毒副作用。血小板源性生长因子-BB（Platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB）是为数不多经FDA批准投入临床使用的生长因子。近年来,因发现其明显的促进神经再生的作用,研究人员拟探究其作为一种神经保护剂的可能。研究者在PD动物模型中发现PDGF-BB可以促进黑质酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）的表达。与此同时,PDGF-BB临床前实验评估中,研究结果显示PD患者对PDGF-BB是安全且耐受的。这些研究为对PDGF-BB的功效及剂量等研究和临床试验奠定了基础。然而,基于PDGF-BB对神经元的保护功能及分子机制的研究尚未有报道。本课题以当前该领域研究结果为基础,以MPTP/MPP...
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠侧脑室立体定位注射
电子科技大学硕士学位论文24图3-1PDGF-BB保护神经元免受MPP+诱导的细胞死亡（a）用CCK8法检测不同浓度MPP+（0-500μM）处理细胞48h后SH-SY5Y细胞的活力；（b）用不同浓度的PDGF-BB（10-100ng/mL）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM），CCK8法测定培养48h后活细胞数；（c）用PDGF-BB（50ng/mL）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。细胞与PDGF-BB和MPP+共孵育48小时，用血球计数板计数细胞数；（d）处理方式同（c），流式细胞仪（d）分析凋亡细胞，凋亡细胞的相对百分比；（e）表示Annexin-V（A-V）阳性细胞的相对百分比，为（d）的量化。Control组（未经处理组）标准化为1，图中所示数据均为control组的相对值。所有数据均为至少三个独立实验的平均值±标准差，“***”表示与control组相比P<0.001。“##”表示P<0.01，“###”表示P<0.001。数据分析采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni事后检验。
电子科技大学硕士学位论文26图3-2PDGF-BB抑制MPP+诱导的神经元ROS生成（a）用MPP+（250μM）处理SH-SY5Y细胞（0-360min），用DCFH-DA试剂盒检测细胞ROS的产生，在多功能酶标仪中读取荧光；（b）用PDGF-BB（50ng/mL）和/或PBN（500uM）/mitoTEMPO（100uM）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。细胞再孵育3小时，然后进行ROS检测；（c）将SH-SY5Y细胞经PDGF-BB（50ng/mL）预处理30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。将细胞再孵育3小时，在显微镜下拍摄具有代表性的免疫荧光图像（图像中的标尺为50μm）；（d）细胞经与（b）相同的处理，培养48小时后用CCK8法检测细胞活力。control组（未经处理组）标准化为1，（a），（b）和（d）所有数据表示与control组的相对值。所有数据均表示为至少三个独立实验的平均值±标准差，“*”表示与control组相比P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。“#”表示与单用MPP+处理的细胞组相比P<0.05，“###”表示P<0.001。数据分析采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni事后检验。
本文编号：3493990
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠侧脑室立体定位注射
电子科技大学硕士学位论文24图3-1PDGF-BB保护神经元免受MPP+诱导的细胞死亡（a）用CCK8法检测不同浓度MPP+（0-500μM）处理细胞48h后SH-SY5Y细胞的活力；（b）用不同浓度的PDGF-BB（10-100ng/mL）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM），CCK8法测定培养48h后活细胞数；（c）用PDGF-BB（50ng/mL）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。细胞与PDGF-BB和MPP+共孵育48小时，用血球计数板计数细胞数；（d）处理方式同（c），流式细胞仪（d）分析凋亡细胞，凋亡细胞的相对百分比；（e）表示Annexin-V（A-V）阳性细胞的相对百分比，为（d）的量化。Control组（未经处理组）标准化为1，图中所示数据均为control组的相对值。所有数据均为至少三个独立实验的平均值±标准差，“***”表示与control组相比P<0.001。“##”表示P<0.01，“###”表示P<0.001。数据分析采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni事后检验。
电子科技大学硕士学位论文26图3-2PDGF-BB抑制MPP+诱导的神经元ROS生成（a）用MPP+（250μM）处理SH-SY5Y细胞（0-360min），用DCFH-DA试剂盒检测细胞ROS的产生，在多功能酶标仪中读取荧光；（b）用PDGF-BB（50ng/mL）和/或PBN（500uM）/mitoTEMPO（100uM）预处理SH-SY5Y细胞30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。细胞再孵育3小时，然后进行ROS检测；（c）将SH-SY5Y细胞经PDGF-BB（50ng/mL）预处理30min，不经洗涤加入MPP+（250μM）。将细胞再孵育3小时，在显微镜下拍摄具有代表性的免疫荧光图像（图像中的标尺为50μm）；（d）细胞经与（b）相同的处理，培养48小时后用CCK8法检测细胞活力。control组（未经处理组）标准化为1，（a），（b）和（d）所有数据表示与control组的相对值。所有数据均表示为至少三个独立实验的平均值±标准差，“*”表示与control组相比P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。“#”表示与单用MPP+处理的细胞组相比P<0.05，“###”表示P<0.001。数据分析采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni事后检验。
本文编号：3493990
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