HDAC3在血脑屏障损伤中的作用及机制研究

发布时间：2021-11-16 14:23

　　工作目的:血脑屏障是由内皮细胞、周细胞和星形胶质细胞等构成的复杂结构,位于脑实质和血管系统之间。血脑屏障的存在主要是将中枢神经系统与外周组织分开。为了维持中枢神经系统内的稳态平衡。血脑屏障控制着从血液到大脑以及从大脑到血液的物质、营养和细胞转移。包括脑损伤、缺血性中风、多发性硬化症、癫痫、帕金森病、阿尔茨海默病和重度抑郁症在内的多种神经系统疾病均发现了血脑屏障破坏的病理学基础。血脑屏障完整性的丧失将导致循环内的细胞因子和免疫细胞进入中枢神经系统,进一步激活神经胶质细胞并引起细胞外环境的改变,对神经系统的功能造成十分严重的破坏。因此,在神经系统疾病中探索一种有效的保护血脑屏障的方法十分必要,将会为临床上的治疗提供新的思路进而改善患者预后并减轻其造成的巨大社会负担。在多种神经系统疾病中,组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylase,HDAC）及组蛋白去乙酸化酶3（Histone deacetylase3,HDAC3）的作用已被发掘并应用。然而不同HDAC亚型,尤其是HDAC3在神经系统血脑屏障方面的调控作用还知之甚少。已知HDAC3在调控神经炎症和神经保护方面的作用,在多种神经... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２－１?ＨＢＭＥＣ中ＯＧＤ／Ｒ后促进核内ＨＤＡＣ３表达增高并增强核内ＨＤＡＣ３的活性

ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达和分布情况。使用免疫荧光我们发现，相较于正常状态，ＯＧＤ／Ｒ损??伤显著降低了这些蛋白在膜上的表达水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６处理可以显著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在细胞膜的表达（图２－３?ａ）。进一步，我们使用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ检测蛋白??４２??

丨！?１１１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＯＧＤ／Ｒ?ＯＧＤ／Ｒ??＋ＲＧＦＰ９６６??图２－２特异性抑制ＨＤＡＣ３保护ＨＢＭＥＣ在ＯＧＤ／Ｒ后发生的通透性完整性损伤。??（ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ检测结果显示，使用ＲＧＦＰ９６６特异性抑制ＨＤＡＣ３后，组蛋白??Ｈ３Ｋ９的乙酰化水平增高。（ｂ）利用ＩｍａｇｅＪ软件对Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ条带进行的灰度测??定统计结果。（ｃ）使用ＲＧＦＰ９６６对ＨＤＡＣ１－３干预特异性情况的活性检测。（ｄ）??在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，给予ＲＧＦＰ９６６处理并使用ＨＴＣ－ｄｅｘｔｒａｎ对内皮细胞??通透性进行渗透实验（ｅ）在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，给予ＲＧＦＰ９６６处理并使??用ＴＥＥＲ实验对内皮细胞的完整性进行检测。（ｆ）使用ＷＳＴ－１对细胞活性进行检测??（ｇ）使用ＴＵＮＥＬ实验对细胞凋亡进行检测。（ｈ）?ＴＵＮＥＬ阳性细胞定量统计图。??ｎ＝４，＊ｐ＜０．０５ｖｓ?ｎｏｒｍａｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ，＃ｐ＜０．０５?ｖｓＯＧＤ／Ｒ。??３．３特异性抑制ＨＤＡＣ３可以恢复ＯＧＤ／Ｒ后紧密连接蛋白Ｃｌａｕｄｉｎ－５的表达??鉴于紧密连接蛋白对内皮细胞通透性的影响，在一共２４小时的ＯＧＤ／Ｒ损伤后，??我们进一步检测了紧密连接蛋白ＺＯ－１、Ｃｌａｕｄｉｎ－５和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ以及黏着连接蛋白ＶＥ－??ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达和分布情况。使用免疫荧光我们发现，相较于正常状态，ＯＧＤ／Ｒ损??伤显著降低了这些蛋白在膜上的表达水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６处理可以显著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在细胞膜的表达（图２－３?ａ）。进一步


本文编号：3499060