多肽介导纳米载药系统靶向治疗脑胶质瘤

发布时间：2021-11-19 10:18

　　脑胶质瘤是颅内最常见的恶性原发性肿瘤和死亡率最高的十类肿瘤之一。目前,针对脑胶质瘤的常规治疗方式如手术、放疗、化疗等均难以达到良好的治疗效果。大多数有极好治疗前景的药物由于受血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）限制或缺乏靶向性等因素难以自主浓集于胶质瘤部位,从而无法发挥疗效。因此,脑胶质瘤的治疗仍然是一个全球性的难题。靶向纳米载药系统在肿瘤的治疗中逐渐突显出独特的优势和良好的临床应用前景。本文针对脑胶质瘤早期及中晚期的不同生理特性,设计了以下两种药物靶向递送及治疗策略。1、脑胶质瘤早期,BBB保持完整,药物需通过跨BBB主动靶向才能到达胶质瘤部位。选用对BBB及胶质瘤细胞的高亲和性多肽作为靶向头基,有望实现BBB-胶质瘤双重靶向效果。鉴于胶质瘤呈蟹爪样浸润生长,与正常的脑组织无明显边界的特点,有必要选用能特异性识别胶质瘤细胞的药物,在不损伤正常脑细胞的基础上有效杀伤胶质瘤细胞。2、在脑胶质瘤中晚期,BBB受到破坏；此时的脑胶质瘤与一般肿瘤一样,具有EPR效应和肿瘤微环境。药物可以通过EPR效应被动靶向直接蓄积于胶质瘤部位。在此基础上,采用具有高效介导药物跨膜入胞... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 Angiopep修饰的载基因纳米粒靶向治疗脑胶质瘤
    1 材料和仪器
        1.1 试剂和材料
        1.2 仪器
        1.3 细胞株
        1.4 实验动物
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 PAMAM-PEG-Angiopep的合成与表征
        2.3 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的制备与表征
            2.3.1 制备
            2.3.2 粒径、Zeta电位
            2.3.3 透射电镜
        2.4 PAMAM-PEG-Angiopep/DNA体外毒性考察
        2.5 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的入胞情况
        2.6 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL体外药效学评价
        2.7 脑胶质瘤模型鼠的构建
        2.8 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL体内药效学评价
            2.8.1 实验分组及给药方案
            2.8.2 原位TUNEL检测脑胶质瘤凋亡
            2.8.3 脑胶质瘤模型鼠存活时间考察
        2.9 数据统计
    3 实验结果
        3.1 PAMAM-PEG-Angiopep的表征
        3.2 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的表征
        3.3 PAMAM-PEG-Angiopep/DNA体外毒性考察
        3.4 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL的入胞情况
        3.5 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL体外药效学评价
        3.6 PAMAM-PEG-Angiopep/pORF-TRAIL体内药效学评价
            3.6.1 原位TUNEL检测脑胶质瘤凋亡
            3.6.2 脑胶质瘤模型鼠存活时间考察
    4 讨论
        4.1 载基因纳米粒的系统安全性及粒径分布情况
        4.2 载基因纳米粒进入肿瘤细胞及基因转染能力
        4.3 载基因纳米粒治疗脑胶质瘤的药效学评价
    5 小结
第二章 dtACPP修饰的肿瘤靶向智能纳米粒的构建及体内外评价
    第一节 dtACPP及相应纳米载体的设计、构建及评价
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
            1.3 细胞株
            1.4 实验动物
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 肿瘤靶向性纳米载体dtACPPD的合成与表征
                2.2.1 dtACPPD的合成
                2.2.2 dtACPPD的表征
            2.3 MMP2酶切
            2.4 SDS-PAGE验证MMP2酶切效果
            2.5 dtACPPD在不同细胞系上的摄取
            2.6 荷瘤模型鼠的构建
                2.6.1 脑胶质瘤模型鼠
                2.6.2 皮下瘤模型鼠
            2.7 dtACPPD在荷瘤模型鼠中的体内分布
                2.7.1 dtACPPD在脑胶质瘤模型鼠中的体内分布
                2.7.2 dtACPPD在皮下瘤模型鼠中的体内分布
        3 实验结果
            3.1 dtACPPD的表征
            3.2 SDS-PAGE验证MMP2酶切效果
            3.3 dtACPPD在不同细胞系上的摄取
            3.4 dtACPPD在荷瘤模型鼠中的体内分布
                3.4.1 dtACPPD在脑胶质瘤模型鼠中的体内分布
                3.4.2 dtACPPD在皮下瘤模型鼠中的体内分布
        4 讨论
            4.1 去屏蔽化验证
            4.2 dtACPPD的细胞摄取效率
            4.3 dtACPPD的肿瘤靶向性
    第二节 dtACPP修饰的肿瘤靶向智能纳米粒的构建及体内外评价
        1 材料和仪器
            1.1 材料和试剂
            1.2 仪器
        2 实验方法
            2.1 肿瘤靶向智能纳米粒dtACPPD/DNA的制备和包封情况
                2.1.1 制备
                2.1.2 凝胶电泳
            2.2 dtACPPD/DNA的表征
                2.2.1 粒径、Zeta电位
                2.2.2 原子力显微镜
            2.3 dtACPPD/DNA在不同细胞系上的毒性考察
            2.4 dtACPPD/DNA在不同细胞系上的摄取情况
            2.5 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的体内分布
                2.5.1 dtACPPD/DNA在脑胶质瘤模型鼠上的体内分布
                2.5.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的体内分布
            2.6 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的瘤内基因表达
                2.6.1 dtACPPD/DNA在脑胶质瘤模型鼠上的瘤内基因表达
                2.6.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的瘤内基因表达
        3 实验结果
            3.1 dtACPPD/DNA凝胶电泳
            3.2 dtACPPD/DNA的表征
            3.3 dtACPPD/DNA在不同细胞系上的毒性考察
            3.4 dtACPPD/DNA在不同细胞系上的细胞摄取效率评价
                3.4.1 dtACPPD/DNA在U-87细胞系上的摄取
                3.4.2 dtACPPD/DNA在BEL-7402细胞系上的摄取
            3.5 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的体内分布
                3.5.1 dtACPPD/DNA在脑胶质瘤模型鼠上的体内分布
                3.5.2 dtACPPD/DNA在皮下瘤模型鼠上的体内分布
            3.6 dtACPPD/DNA在荷瘤模型鼠上的瘤内基因表达
                3.6.1 dtACPPD/DNA在脑胶质瘤模型鼠上的瘤内基因表达
                3.6.2 dtACPPD/DNA在荷皮下瘤模型鼠上的瘤内基因表达
        4 讨论
            4.1 肿瘤靶向纳米载体dtACPPD包封质粒DNA的能力
            4.2 dtACPP修饰的载基因纳米粒的细胞摄取效率
            4.3 dtACPPD/DNA的肿瘤靶向性及瘤内基因转染能力
        5 小结
第三章 dtACPP修饰的肿瘤靶向智能纳米粒联合治疗脑胶质瘤
    1 材料和仪器
        1.1 材料和试剂
        1.2 仪器
    2 实验方法
        2.1 肿瘤靶向智能双载药纳米粒dtACPPD/shVEGF-DOX的制备和表征
            2.1.1 shVEGF-DOX复合物的制备
            2.1.2 dtACPPD/shVEGF-DOX的制备
            2.1.3 dtACPPD/shVEGF-DOX凝胶电泳
            2.1.4 dtACPPD/shVEGF-DOX的表征
        2.2 胶质瘤细胞内源性VEGF mRNA下调的体外评价
        2.3 shVEGF与DOX诱导胶质瘤细胞凋亡的体外评价
        2.4 体内抗脑胶质瘤药效学综合评价
            2.4.1 实验分组及给药方案
            2.4.2 脑胶质瘤组织中内源性VEGF的下调评价
            2.4.3 脑胶质瘤组织中的血管生成抑制评价
            2.4.4 在体检测脑胶质瘤细胞凋亡
            2.4.5 原位TUNEL免疫荧光检测脑胶质瘤细胞凋亡
            2.4.6 脑胶质瘤模型鼠存活时间及体重变化的考察
        2.5 数据统计
    3 实验结果
        3.1 dtACPPD/shVEGF-DOX双载药纳米粒的制备和表征
            3.1.1 shVEGF-DOX复合物的表征
            3.1.2 dtACPPD/shVEGF-DOX凝胶电泳
            3.1.3 dtACPPD/shVEGF-DOX的表征
        3.2 胶质瘤细胞内源性VEGF mRNA下调的体外评价
        3.3 shVEGF与DOX诱导胶质瘤细胞凋亡的体外评价
        3.4 体内抗脑胶质瘤药效学综合评价
            3.4.1 脑胶质瘤组织中内源性VEGF的下调评价
            3.4.2 脑胶质瘤组织中的血管生成抑制评价
            3.4.3 在体检测脑胶质瘤细胞凋亡
            3.4.4 原位TUNEL免疫荧光检测脑胶质瘤细胞凋亡
            3.4.5 脑胶质瘤模型鼠的体重变化及存活时间
    4 讨论
        4.1 dtACPPD/shVEGF下调VEGF
        4.2 联合给药的必要性
    5 小结
全文总结
创新性
中英文对照缩写
参考文献
发表论文
荣誉奖项
致谢



本文编号：3504839