CIK细胞和肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV500共同介导抗p21Ras单链抗体治疗脑胶质瘤的实验研究

发布时间：2021-11-20 23:50

　　[目的]通过体外实验研究重组腺病毒KGHV500对脑胶质瘤U251细胞生物活性等的影响,通过体内实验研究CIK携带重组腺病毒KGHV500共同介导抗p21Ras单链抗体治疗裸鼠脑胶质瘤移植瘤的效果及靶向性,实现抗p21Ras单链抗体在脑胶质瘤中的持续长效表达,为治疗脑胶质瘤提供实验依据及新方法。[方法]一、重组腺病毒KGHV500和KGHV400的扩增、浓缩、纯化、鉴定:体外利用HEK293细胞将重组腺病毒KGHV500大量扩增;经PCR鉴定其是否含有纤毛片段和单链抗体片段;经双重氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒,利用TCID50法测其滴度;KGHV500以不同MOI值感染人脑胶质瘤U251细胞,以确定KGHV500感染人脑胶质瘤U251细胞的最佳感染复数。二、体外实验:免疫组织化学检测人脑胶质瘤U251细胞表面CD46蛋白的表达情况;透射电镜观察重组腺病毒KGHV500、KGHV400对人脑胶质瘤U251细胞的感染情况;细胞划痕实验检测KGHV500对人脑胶质瘤U251细胞迁移能力的影响;MTT比色实验检测KGHV500对人脑胶质瘤U251细胞活力的影响;Transwell侵袭小室... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＫＧＨＶ５００腺病毒结构示意图??

昆明医科大学硕士研究生学位论文实验结果??重组腺病毒ＫＧＨＶ５００、ＫＧＨＶ４００的扩増、鉴定、纯化、滴度测定以１细胞的ＭＯＩ测定??ＨＥＫ２９３细胞培养和传代??本实验采用ＨＥＫ２９３细胞对重组腺病毒进行包装及扩增，ＨＥＫ２９３细肾细胞，是贴壁依赖型的上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的允许５型腺病毒和其他血清型腺病毒在其上增殖，用含１０％ＦＢＳ的ＥＭ培养液在３７°Ｃ、５％Ｃ０２细胞培养箱中培养，待细胞生长到９０％密度％胰酶消化传代，在实验前准备好所需细胞。??

全圯?荧光???４?ＫＧＨＶ４００?感染?２９３?细胞?３２ｈ?〇２００）??Ｋ２９３细胞３２小时，ＨＥＫ２９３细胞变痩、变。??Ｖ５００的鉴定??腺病毒ＫＧＨＶ５００原液，将其ＤＮＡ作病毒ＤＮＡ中的ＳｃＦｖ片段，Ｆ５／３５条带，证实重组腺病毒含有ＳｃＦｖ片段，

【参考文献】：
期刊论文
[1]CIK细胞在荷瘤鼠体内的肿瘤靶向性与安全性[J]. 刘霞,胡奇婵,王涛,黄睿,崔静,王丽,杨举伦.  临床与实验病理学杂志. 2014(04)
[2]RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响[J]. 曹垒,王颖毅,王希瑞,王协锋,孙关,骆慧,刘宁,尤永平.  中华医学遗传学杂志. 2012 (02)

硕士论文
[1]CIK细胞和重组腺病毒KGHV500共同介导抗p21ras单链抗体治疗胃癌的实验研究[D]. 洪艳玲.昆明医科大学 2017



本文编号：3508333