基于纳米粒子的U251脑瘤细胞系RNA干扰研究
发布时间：2021-11-21 20:16
RNA干扰是一种有效的基因沉默机制,通过短双链RNA降解具有其相同序列的目的基因mRNA来抑制基因表达,目前该技术已被广泛应用于基因功能研究,并为许多恶性疾病的基因治疗提供了应用前景。肿瘤严重危害人类健康并导致死亡,脑胶质瘤是神经系统最常见的肿瘤,约占神经系统肿瘤的40%-50%,由于呈浸润性生长,手术难以彻底根除,尤其需要采用非侵袭性的手段进行治疗。近年来,基于纳米材料的siRNA转染为肿瘤基因治疗提供了一条新的途径。本研究通过兼性的PMAL-C8分子将疏水量子点（QDs）进行亲水修饰,进一步与分子量25KDa的分支状PEI共价交联,制备得到生理状态下具有阳离子的荧光纳米载体,将其应用于siRNA转染显示：当培养基存在血清时,其转染效率和细胞活性都比在无血清状态下要好；观察到由于PEI分子的“质子海绵”作用缓慢释放进入细胞质的绿色荧光Alexa Flour488siRNA;当QD:siRNA=1:2浓度比例包装时能获得最好的基因敲除效率。脑瘤细胞U251的蛋白敲除穿膜实验和基因芯片结果显示JAM2分子与细胞迁移能力相关,但具体调控机制仍需进一步研究。本研究揭示了以纳米材料-siRNA...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词中英文对照
1 文献综述
1.1 RNA干扰(RNAi)
1.1.1 RNA干扰(RNAi)的发展
1.1.2 RNAi的原理
1.1.3 RNAi的主要特点
1.1.4 产生RNAi的几种机制
1.1.5 RNAi与肿瘤基因治疗
1.2 非病毒siRNA转染载体
1.2.1 阳离子脂质体
1.2.2 阳离子聚合物
1.2.3 穿膜肽
1.2.4 无机材料纳米粒子
1.3 纳米传感器与肿瘤诊断
1.3.1 呼出气体样品中肿瘤标志物的检测
1.3.2 依赖蛋白标志物的肿瘤检测
2 阳离子纳米粒子的制备及理化性质
2.1 前言
2.2 仪器与试剂
2.2.1 仪器
2.2.2 试剂
2.3 试验方法
2.3.1 QD-PMAL的制备
2.3.2 QD-PMAL-PEI25k的制备及表征
2.3.3 粒径测定：粒度仪和透射电镜
2.3.4 紫外可见分光光度检测
2.3.5 荧光分光光度扫描
2.3.6 QD-PMAL-PEI25k/siRNA结合比例的确定
2.4 结果与讨论
2.4.1 油相QDs的亲水包装
2.4.2 不同缓冲液条件下QD-PMAL-PEI25k的合成效果
2.4.3 粒子粒径大小和组成
2.4.4 紫外可见及荧光分光光度扫描结果
2.4.5 siRNA吸附能力评价
2.5 小结
3 阳离子纳米粒子介导的siRNA转染条件及机理研究
3.1 前言
3.2 仪器与试剂
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.3 试验方法
3.3.1 U251脑瘤细胞培养
3.3.2 阳离子纳米粒子对细胞毒性测定
3.3.3 血清对阳离子粒子/siRNA复合物转染效率影响
3.3.4 荧光显微镜观察转染过程
3.3.5 阳离子纳米粒子/siRNA转染最优比例浓度确定
3.4 结果与讨论
3.4.1 阳离子纳米粒子在有无血清情况下的细胞毒性
3.4.2 血清对QD-PMAL-PEI25k/siRNA复合物转染效率的影响
3.4.3 荧光纳米粒子复合物转染过程
3.4.4 阳离子纳米粒子/siRNA转染最优比例浓度确定
3.5 小结
4 U251脑瘤细胞系JAM2基因功能研究
4.1 前言
4.2 仪器与试剂
4.2.1 试剂
4.2.2 仪器
4.3 试验方法
4.3.1 免疫组化实验(SABC法)
4.3.2 Westen blot验证蛋白敲除实验
4.3.3 转膜迁徙实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 SABC法免疫组化检测脑瘤样本表面JAM2蛋白表达
4.4.2 Western blot验证蛋白敲除效果
4.4.3 Transwell细胞迁移实验
4.4.4 JAM2沉默后细胞基因表达谱分析
4.5 小结
5 结论
参考文献
个人简历
本文编号：3510166
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词中英文对照
1 文献综述
1.1 RNA干扰(RNAi)
1.1.1 RNA干扰(RNAi)的发展
1.1.2 RNAi的原理
1.1.3 RNAi的主要特点
1.1.4 产生RNAi的几种机制
1.1.5 RNAi与肿瘤基因治疗
1.2 非病毒siRNA转染载体
1.2.1 阳离子脂质体
1.2.2 阳离子聚合物
1.2.3 穿膜肽
1.2.4 无机材料纳米粒子
1.3 纳米传感器与肿瘤诊断
1.3.1 呼出气体样品中肿瘤标志物的检测
1.3.2 依赖蛋白标志物的肿瘤检测
2 阳离子纳米粒子的制备及理化性质
2.1 前言
2.2 仪器与试剂
2.2.1 仪器
2.2.2 试剂
2.3 试验方法
2.3.1 QD-PMAL的制备
2.3.2 QD-PMAL-PEI25k的制备及表征
2.3.3 粒径测定：粒度仪和透射电镜
2.3.4 紫外可见分光光度检测
2.3.5 荧光分光光度扫描
2.3.6 QD-PMAL-PEI25k/siRNA结合比例的确定
2.4 结果与讨论
2.4.1 油相QDs的亲水包装
2.4.2 不同缓冲液条件下QD-PMAL-PEI25k的合成效果
2.4.3 粒子粒径大小和组成
2.4.4 紫外可见及荧光分光光度扫描结果
2.4.5 siRNA吸附能力评价
2.5 小结
3 阳离子纳米粒子介导的siRNA转染条件及机理研究
3.1 前言
3.2 仪器与试剂
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.3 试验方法
3.3.1 U251脑瘤细胞培养
3.3.2 阳离子纳米粒子对细胞毒性测定
3.3.3 血清对阳离子粒子/siRNA复合物转染效率影响
3.3.4 荧光显微镜观察转染过程
3.3.5 阳离子纳米粒子/siRNA转染最优比例浓度确定
3.4 结果与讨论
3.4.1 阳离子纳米粒子在有无血清情况下的细胞毒性
3.4.2 血清对QD-PMAL-PEI25k/siRNA复合物转染效率的影响
3.4.3 荧光纳米粒子复合物转染过程
3.4.4 阳离子纳米粒子/siRNA转染最优比例浓度确定
3.5 小结
4 U251脑瘤细胞系JAM2基因功能研究
4.1 前言
4.2 仪器与试剂
4.2.1 试剂
4.2.2 仪器
4.3 试验方法
4.3.1 免疫组化实验(SABC法)
4.3.2 Westen blot验证蛋白敲除实验
4.3.3 转膜迁徙实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 SABC法免疫组化检测脑瘤样本表面JAM2蛋白表达
4.4.2 Western blot验证蛋白敲除效果
4.4.3 Transwell细胞迁移实验
4.4.4 JAM2沉默后细胞基因表达谱分析
4.5 小结
5 结论
参考文献
个人简历
本文编号：3510166
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3510166.html
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