慢性应激对脑卒中大鼠海马区CRHR1表达水平的影响
发布时间：2021-11-22 06:39
背景卒中后抑郁（post-stroke depression,PSD）是脑卒中后最常见的神经精神障碍性疾病,影响患者日常生活能力的恢复及神经功能缺损,致残率及致死率也逐渐升高。机体受到外界应激从而激活下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamo-pituitary-adrenal,HPA）轴,下丘脑室旁核处促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin-releasing hormone,CRH）短时间内以正反馈的方式使促肾上腺皮质激素释放激素受体1（corticotropin-releasinghormonereceptor 1,CRHR1）表达上调,CRHR1通过与刺激性G蛋白的α亚基（Gs-α）偶联来传递信号,导致腺苷酸环化酶的刺激,产生第二信使环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphat,cAMP）。cAMP的积累反过来刺激蛋白激酶A（cyclic-AMP dependent protein kinase A,PKA）的激活,使cAMP反应元件结合（cAMP response element binding protein,CREB）蛋白磷酸化,...
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验时间流程图
MCAO手术简易图
新乡医学院硕士学位论文24进行检测样品浓度外，余采用5×loadingbuffer进行变性，并于100℃煮样10-15min，晾凉，放入-20℃冰箱中，备用。2.6.2测蛋白浓度（1）称50mg的BSA放置于1.5mL离心管中，加入无酶水至1mL，充分混匀；取10微升的上述溶液放置于990μL水中，将溶液稀释至0.5mg/mL;（2）将0.5mg/mL的标准品分别稀释成0.4mg/kg，0.3mg/kg，0.2mg/kg，0.1mg/kg，0.05mg/kg，0.025mg/kg，0mg/kg；（3）将蛋白上清液用双蒸水稀释20倍；取一96孔板，将标准品浓度从高到低顺序加入，各做一副孔。待测样品取20μL放入孔中，加入现配的BCA工作液（A液和B液按照A:B=50:1配置）180μL混匀，37℃孵育箱中半小时（加样时尽量动作轻柔，以防产生气泡影响蛋白浓度读数）。（4）把已孵育的96孔板放入酶标仪仪器中，以波长562nm测定其吸光度，制作标准曲线（如图3示）；40mg/浓度即为上样体积。图3蛋白浓度标准曲线图2.6.3WesternBlot实验具体步骤（1）SDS-PAGE凝胶配制方法：薄厚玻璃板洗净擦干后放于烘干箱中，待两面无明显水渍后，固定于制胶器上，薄板面向自己。首先用双蒸水检验胶板是否漏胶，根据本实验分子量选用5％浓缩胶和12％分离胶。检查胶板无漏液，将双蒸水倒出，并用吸水纸将残余水吸净，将配制好的分离胶用1mL枪头注入玻璃板空隙内，每板胶分离胶约为5.0mL，并用无水乙醇覆盖，直至分离胶完全凝固至一条平稳的线。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CREB1、BDNF基因多态性与河南汉族老年男性卒中后抑郁的关联性分析[J]. 刘柳,刘晓芳,蒋超,王建平. 郑州大学学报(医学版). 2019(04)
[2]卒中后抑郁影响因素及其与脑源性神经营养因子基因多态性的关系研究[J]. 何明,马飞月. 实用心脑肺血管病杂志. 2019(05)
[3]曲唑酮与舍曲林治疗抑郁障碍疗效和安全性分析[J]. 康选民,李敏. 中国药物与临床. 2019(08)
[4]卒中后淡漠综合征的研究进展[J]. 王少朋,赵弘轶,王诺,迟丽屹,黄勇华. 中国脑血管病杂志. 2019(04)
[5]缺血再灌注联合慢性不可预知刺激构建卒中后抑郁新模型[J]. 赵兵兵,李涛,王豆,周奇,闫咏梅. 中国组织工程研究. 2019(11)
[6]关于卒中后抑郁发病机制的研究新进展[J]. 刘增雪,陆静珏,周一心. 中国医药导报. 2019(02)
[7]卒中后抑郁的危险因素研究进展[J]. 马瑾,杨晓桐,张文睿,王红星. 中华医学杂志. 2019 (03)
[8]脑卒中后抑郁与血清胆红素及非高密度脂蛋白胆固醇的关系[J]. 郭鑫,王静,路月英,贾娜娜,郭建兵,李贺斌,苑杰. 中国老年学杂志. 2019(01)
[9]柴胡疏肝散治疗卒中后抑郁的网络药理学研究[J]. 盛蕾,刘元月,胡丹,范琪琪,朱亦诚,张晓浩,凌志香,江雪梅,丁彩霞,肖婧,汤银燕,李传游,张兰坤,李婷婷,朱羽佳,陆茵. 中草药. 2018(15)
[10]经颅直流电刺激对卒中后抑郁的疗效[J]. 李泓钰,王强,王静,宋鲁平. 中国康复理论与实践. 2018(05)
本文编号：3511140
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验时间流程图
MCAO手术简易图
新乡医学院硕士学位论文24进行检测样品浓度外，余采用5×loadingbuffer进行变性，并于100℃煮样10-15min，晾凉，放入-20℃冰箱中，备用。2.6.2测蛋白浓度（1）称50mg的BSA放置于1.5mL离心管中，加入无酶水至1mL，充分混匀；取10微升的上述溶液放置于990μL水中，将溶液稀释至0.5mg/mL;（2）将0.5mg/mL的标准品分别稀释成0.4mg/kg，0.3mg/kg，0.2mg/kg，0.1mg/kg，0.05mg/kg，0.025mg/kg，0mg/kg；（3）将蛋白上清液用双蒸水稀释20倍；取一96孔板，将标准品浓度从高到低顺序加入，各做一副孔。待测样品取20μL放入孔中，加入现配的BCA工作液（A液和B液按照A:B=50:1配置）180μL混匀，37℃孵育箱中半小时（加样时尽量动作轻柔，以防产生气泡影响蛋白浓度读数）。（4）把已孵育的96孔板放入酶标仪仪器中，以波长562nm测定其吸光度，制作标准曲线（如图3示）；40mg/浓度即为上样体积。图3蛋白浓度标准曲线图2.6.3WesternBlot实验具体步骤（1）SDS-PAGE凝胶配制方法：薄厚玻璃板洗净擦干后放于烘干箱中，待两面无明显水渍后，固定于制胶器上，薄板面向自己。首先用双蒸水检验胶板是否漏胶，根据本实验分子量选用5％浓缩胶和12％分离胶。检查胶板无漏液，将双蒸水倒出，并用吸水纸将残余水吸净，将配制好的分离胶用1mL枪头注入玻璃板空隙内，每板胶分离胶约为5.0mL，并用无水乙醇覆盖，直至分离胶完全凝固至一条平稳的线。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CREB1、BDNF基因多态性与河南汉族老年男性卒中后抑郁的关联性分析[J]. 刘柳,刘晓芳,蒋超,王建平. 郑州大学学报(医学版). 2019(04)
[2]卒中后抑郁影响因素及其与脑源性神经营养因子基因多态性的关系研究[J]. 何明,马飞月. 实用心脑肺血管病杂志. 2019(05)
[3]曲唑酮与舍曲林治疗抑郁障碍疗效和安全性分析[J]. 康选民,李敏. 中国药物与临床. 2019(08)
[4]卒中后淡漠综合征的研究进展[J]. 王少朋,赵弘轶,王诺,迟丽屹,黄勇华. 中国脑血管病杂志. 2019(04)
[5]缺血再灌注联合慢性不可预知刺激构建卒中后抑郁新模型[J]. 赵兵兵,李涛,王豆,周奇,闫咏梅. 中国组织工程研究. 2019(11)
[6]关于卒中后抑郁发病机制的研究新进展[J]. 刘增雪,陆静珏,周一心. 中国医药导报. 2019(02)
[7]卒中后抑郁的危险因素研究进展[J]. 马瑾,杨晓桐,张文睿,王红星. 中华医学杂志. 2019 (03)
[8]脑卒中后抑郁与血清胆红素及非高密度脂蛋白胆固醇的关系[J]. 郭鑫,王静,路月英,贾娜娜,郭建兵,李贺斌,苑杰. 中国老年学杂志. 2019(01)
[9]柴胡疏肝散治疗卒中后抑郁的网络药理学研究[J]. 盛蕾,刘元月,胡丹,范琪琪,朱亦诚,张晓浩,凌志香,江雪梅,丁彩霞,肖婧,汤银燕,李传游,张兰坤,李婷婷,朱羽佳,陆茵. 中草药. 2018(15)
[10]经颅直流电刺激对卒中后抑郁的疗效[J]. 李泓钰,王强,王静,宋鲁平. 中国康复理论与实践. 2018(05)
本文编号：3511140
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