解偶联蛋白2减缓高糖加重缺氧性神经细胞损伤及其与线粒体分裂/融合关系的实验研究

发布时间：2021-11-27 03:43

　　目的探讨解偶联蛋白2减缓高糖加重缺氧导致的神经元损伤的作用,初步阐明其与线粒体分裂/融合的关系。方法本实验利用高糖联合缺氧和高乳酸模拟在体糖尿病/高血糖合并脑缺血损伤状态。为验证糖尿病/高血糖状态缺氧对HT22细胞的损伤作用和对ROS产生的影响,将体外培养海马神经细胞（HT22）分为:（1）对照组;（2）高糖组:30、40、50和60m M葡萄糖干预HT22细胞;干预24h后,分别缺氧0h和缺氧4h后复氧0、6、12和18h。（3）正常血糖缺氧组:HT22细胞;正常培养后,分别缺氧0h和缺氧4h后复氧0、6、12和18h。（4）高糖缺氧组:30、40、50和60m M葡萄糖干预HT22细胞;干预24h后,分别缺氧0h和缺氧4h后复氧0、6、12和18h。（5）高乳酸组:2.5、5、7.5和10m M乳酸干预HT22细胞24h。倒置显微镜观察细胞形态学改变;DCFH-DA探针检测ROS生成情况;为探讨UCP2对高糖状态缺氧神经元损伤的减缓作用,及与ROS生成,线粒体分裂/融合关系,利用UCP2转染的海马神经元细胞（UCP2）和相应空载体转染的海马神经元细胞（HT-NC）进行实验。分为以下... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

高糖对HT22细胞损伤作用(×100)

图 2：高糖对 HT22 细胞 Cleaved Caspase-3 表达的影响。 con:对照组；30mM、40m和 60mM 分别为不同糖浓度干预组。*:与对照组比较 P<0.05. HT22 细胞 ROS 生成的影响预 HT22 细胞 24h 后采用 DCFH-DA 法检测 ROS，结果显示(见生 ROS(图 3A); 50mM 高糖干预 HT22 细胞，有少量 ROS 生成，3B); 60mM 高糖干预 HT22 细胞，ROS 较 50mM 组明显增加(图 3 HT22 细胞的损伤作用及 ROS 生成的影响对 HT22 细胞形态及活性率的影响，对照组 HT22 细胞生长良好，呈长梭形，铺路石样排一，细胞大4A)；2.5mM 高乳酸组 HT22 细胞数量略有减少，少数细胞形状不T22 细胞数量明显减少，形状不规则，细胞大小不一，胞浆减少

图 4：高乳酸对 HT22 细胞损伤作用(×100)。 A:对照组；B:5mM 高乳酸组；C:10mM 高乳酸组；D:高乳酸对 活性率的影响(con:对照组；2.5mM、5mM、7.5mM 和 10mM 分别为不同乳酸浓度干预组)。*:与对照组比较 P< 高乳酸对 HT22 细胞 Cleaved Caspase-3 表达的影响高乳酸干预 24h 后提取组织蛋白，进行 Western-blotting 分析。如图 5，在不同度干预 HT22 细胞，随着乳酸浓度的增加，线粒体依赖的凋亡执行因子 Clespase-3 的表达逐渐增加(P<0.05)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]2型糖尿病高血糖与炎症两者联合对血管病变的影响[J]. 唐振媚,林芳,黄群英,蒋东培,邱建刚,曾燕,庞振瑶.  中国医药导报. 2014(03)
[2]艾灸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质NF-κB p65蛋白表达的影响[J]. 肖爱娇,罗小泉.  中华中医药杂志. 2013(12)
[3]小胶质细胞对成年哺乳动物神经发生的调节作用[J]. 刘志强,张均田,唐民科.  生理科学进展. 2011(01)
[4]糖尿病小鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的变化[J]. 杨力,赵培园,战雅,李玲,于建云,郭泽云.  昆明医学院学报. 2010(06)
[5]高血糖和脑缺血对树鼩皮层不同区域VEGF表达的影响[J]. 陈静,李树清.  中国病理生理杂志. 2010(02)
[6]小胶质细胞与脑缺血[J]. 宋玉成,刘永海.  国际脑血管病杂志. 2006(06)
[7]能量代谢基因表达改变在大鼠卒中发病学中的意义[J]. 王先梅,杨丽霞,严睿,祝善俊,齐峰,郭传明,赵斌,惠汝太.  中国急救医学. 2004(08)
[8]星形胶质细胞条件培养液对活性氧所致的神经元损伤的防护作用[J]. 莫永炎,陈瑗,周玫.  细胞生物学杂志. 2000(01)

博士论文
[1]缺血再灌注中酸敏感离子通道引起神经元损伤机制及葛根素保护作用的研究[D]. 顾玲.浙江大学 2010

硕士论文
[1]糖尿病高血糖通过氧化损伤加重局灶性脑缺血再关注损伤[D]. 王佳陪.宁夏医科大学 2014



本文编号：3521498