PPARγ介导的平滑肌细胞表型转化在蛛网膜下腔出血中的作用及机制研究

发布时间：2021-11-28 07:44

　　第一部分贝沙罗汀通过PPARγ介导的途径抑制SD大鼠蛛网膜下腔出血后的血管平滑肌细胞表型转化的机制探究背景:血管平滑肌细胞在蛛网膜下腔出血后的中枢神经系统病理生理过程中扮演着重要的角色。对于PPARγ介导的平滑肌细胞的表型转化在蛛网膜下腔出血中的影响,目前尚未明了。本研究主要探讨了贝沙罗汀通过PPARγ介导的途径对蛛网膜下腔出血后脑动脉的平滑肌细胞表型转化的影响作用以及潜在的神经血管保护机制。方法:选取成年雄性Sprague-Dawley大鼠（SD鼠）,使用血管内穿刺模型建立蛛网膜下腔出血模型。使用改良Garcia评分（modified Garcia score）用于评估大鼠神经功能损伤情况。使用蛛网膜下腔出血分级（SAH grading）,死亡率和脑水含量（brain water content）用于评估蛛网膜下腔出血的严重程度。激光散斑（Laser speckle）用于测量大脑皮层血流量。使用免疫蛋白印迹（Western blot,WB）和免疫荧光（immunofluorescence）检测血管平滑肌细胞表型（α-SMA和Smemb）的标志物。使用WB和IF测量5-脂氧合酶活化蛋白... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

1血管内穿刺的示意图

图 1.1.2 载体质粒的示意图Figure 1.1.2 Schematic diagram of vector plasmids.6.2 实验原理RNA 干扰（RNA interference，RNAi）是与靶基因序列同源的双链 RNdouble-stranded RNA，dsRNA）所诱导的一种特异性基因沉默现象。RNAi 技使用可以特异性地减少或关闭特定基因的表达，因此该技术已被广泛应用于治疗领域， 用于探索基因功能和传染病以及恶性肿瘤。处理细胞内转录hRNA 并将其掺入 RNA 诱导的沉默复合物（RISC）中以指导核酸酶降解靶 RN毒 shRNA 载体也可用于 RNAi 干扰，具有抗生素标记的载体可继续抑制细胞基 因的表达数周或更长时间。与其他载体相比，病毒 shRNA 载体可以成功接感染 细胞进行基因沉默，转染效果稳定，可以避免质粒转染效率低下造成便。实验目的：构建带有 EGFP 荧光标记和目的序列的重组干扰载体。

架质粒 pHBAd-BHG，并用 LipofiterTM 转染试剂转染。具体步骤为：2ug 重组腺病毒载体质粒 h-SNCA，4ug 主链质粒 pHBAd-BHG。用 300 μl 的 DMEM 培养液进行稀释，室温放置 5 min。b．取 15 ul 的 LipofiterTM，用 300 μl 的 DMEM 培养液进行稀释，室温放置 5min。c．将两者混和，室温避光放置 20 min。然后将混合物加入 60mm 培养皿中，用 8 个字摇动，并置于 37℃含 5％CO2 的培养箱中。换液转染病毒之后过 6 小时，将细胞培养液换为新鲜培养液。收毒（P1）：每天观察细胞出毒迹象。出毒的现象是细胞变得更大，更圆，呈现葡萄状，并开始出 现明显的斑块。大多数细胞留在病灶中并从底部脱落以进行出毒。将60mm 培养皿中的所有细胞和培养物置于 15ml 离心管中。


本文编号：3524004