骨化三醇对脑胶质瘤小鼠模型中髓系抑制性细胞的影响
发布时间：2021-11-29 07:48
髓系来源抑制细胞（Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）是一类未成熟,具有抑制性功能的细胞。研究发现MDSCs在肿瘤微环境中扮演重要角色。肿瘤来源的细胞因子和生长因子能够促进MDSCs扩增或者活化,MDSCs则通过多种机制产生免疫耐受环境促进肿瘤生长。MDSCs是肿瘤免疫疗法失败的主要原因之一。针对MDSCs的靶向治疗能够减少免疫抑制作用,从而增强对免疫疗法的反应。骨化三醇（Calcitriol）是维生素D3的活性形式,通过与维生素D受体（Vitamin D receptor,VDR）结合发挥生物学功能。骨化三醇除了调节钙和磷稳态之外,其还具有影响肿瘤生长和免疫系统稳态的作用。但是,骨化三醇对在胶质瘤及其微环境中MDSCs的作用仍然未知。首先,我们对C57BL/6J小鼠进行骨化三醇预处理,对照小鼠给与相同剂量的生理盐水,两周之后使用小鼠胶质瘤细胞（GL261）构建原位肿瘤模型,并记录小鼠的生存时间,计算两组荷瘤小鼠的生存率。结果发现,与对照组相比,注射骨化三醇的荷瘤小鼠生存时间明显缩短（p<0.05）,肿瘤的面积也显著增大（p<0.0...
【文章来源】：长春理工大学吉林省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脑组织单细胞CD4+和CD8a+圈门策略A.为流式细胞散点图；B.根据FSC-A与FSC-H结合圈出单细胞；C.从图b圈出的单细胞圈出CD45阳性细胞；D.从CD45阳性中分别圈出CD4和CD8a阳性细胞
魇较赴?跫觳饽宰橹??⒃嗪凸?髓中MDSCs，CD4+和CD8a+的表达情况。另外，利用骨髓细胞分化实验，检测骨化三醇对MDSCs的作用。同时，进行了肿瘤组织的VDR检测，以此探究骨化三醇通过与其受体结合对小鼠胶质瘤模型中MDSCs的作用。3.1GL261小鼠肿瘤模型的建立及分析首先，为了了解骨化三醇对GL261小鼠胶质瘤模型的作用。体内实验方案如图3.1所示，我们把18只8周C57/BJ小鼠随机分为两组，进行骨化三醇预处理，一组注射骨化三醇组作为实验组，另一组注射对照试剂作为对照组。两周之后，原位移植GL261细胞到小鼠的颅内。图3.1体内实验方案3.1.1GL261胶质瘤模型的生存分析按照2.2.10实验方法构建小鼠的GL261胶质瘤模型（图3.2A），GL261细胞在小鼠的颅内逐渐成瘤，随着小鼠颅内肿瘤的生长，荷瘤小鼠会出现明显的发瘤特征，当小鼠出现明显的弓背、食欲减退、行走不良并且体重急剧减轻（一般3天内减少1g左右）即可定义为小鼠已经开始发瘤。此时密切观察小鼠行为特征以及体重变化，若小鼠体重每天持续下降（下降到18g）或者行动极其不便，则人为定义小鼠患瘤死亡。记录18只小鼠的存活天数，并绘制小鼠的生存曲线。实验结果如图3.2B所示，与对照组相比，实验组的小鼠生存时间显著性减少（P<0.05）。因此，由小鼠的生存结果可知，骨化三醇能够减少荷瘤小鼠的生存时间。
第三章实验结果28图3.2肿瘤模型的建立及生存分析A.将3×105个GL261小鼠胶质瘤细胞注射到小鼠的纹状体内；B.注射骨化三醇和对照试剂的荷瘤小鼠生存曲线（N=9，*P<0.05）3.1.2GL261肿瘤模型脑组织和脾脏分析由结果3.1.1可知骨化三醇缩短了荷瘤小鼠的生存时间。因此，我们观察在同一时间点，注射骨化三醇和对照试剂的荷瘤小鼠，脑组织和脾脏的外观以及重量的区别。按照2.2.10的方法构建同样的小鼠胶质瘤模型，并且我们在种瘤18天之后，同时取出注射骨化三醇和对照试剂荷瘤小鼠的脑组织和脾脏，然后进行拍照和称重。图3.3GL261肿瘤模型脑组织和脾脏分析A．对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脑组织；B.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠脑组织重量统计；C.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脾脏；D.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脾脏重量统计。（N=5，*P<0.05，ns无差异）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Protective links between vitamin D, inflammatory bowel disease and colon cancer[J]. Stacey Meeker,Audrey Seamons,Lillian Maggio-Price,Jisun Paik. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
本文编号：3526126
【文章来源】：长春理工大学吉林省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脑组织单细胞CD4+和CD8a+圈门策略A.为流式细胞散点图；B.根据FSC-A与FSC-H结合圈出单细胞；C.从图b圈出的单细胞圈出CD45阳性细胞；D.从CD45阳性中分别圈出CD4和CD8a阳性细胞
魇较赴?跫觳饽宰橹??⒃嗪凸?髓中MDSCs，CD4+和CD8a+的表达情况。另外，利用骨髓细胞分化实验，检测骨化三醇对MDSCs的作用。同时，进行了肿瘤组织的VDR检测，以此探究骨化三醇通过与其受体结合对小鼠胶质瘤模型中MDSCs的作用。3.1GL261小鼠肿瘤模型的建立及分析首先，为了了解骨化三醇对GL261小鼠胶质瘤模型的作用。体内实验方案如图3.1所示，我们把18只8周C57/BJ小鼠随机分为两组，进行骨化三醇预处理，一组注射骨化三醇组作为实验组，另一组注射对照试剂作为对照组。两周之后，原位移植GL261细胞到小鼠的颅内。图3.1体内实验方案3.1.1GL261胶质瘤模型的生存分析按照2.2.10实验方法构建小鼠的GL261胶质瘤模型（图3.2A），GL261细胞在小鼠的颅内逐渐成瘤，随着小鼠颅内肿瘤的生长，荷瘤小鼠会出现明显的发瘤特征，当小鼠出现明显的弓背、食欲减退、行走不良并且体重急剧减轻（一般3天内减少1g左右）即可定义为小鼠已经开始发瘤。此时密切观察小鼠行为特征以及体重变化，若小鼠体重每天持续下降（下降到18g）或者行动极其不便，则人为定义小鼠患瘤死亡。记录18只小鼠的存活天数，并绘制小鼠的生存曲线。实验结果如图3.2B所示，与对照组相比，实验组的小鼠生存时间显著性减少（P<0.05）。因此，由小鼠的生存结果可知，骨化三醇能够减少荷瘤小鼠的生存时间。
第三章实验结果28图3.2肿瘤模型的建立及生存分析A.将3×105个GL261小鼠胶质瘤细胞注射到小鼠的纹状体内；B.注射骨化三醇和对照试剂的荷瘤小鼠生存曲线（N=9，*P<0.05）3.1.2GL261肿瘤模型脑组织和脾脏分析由结果3.1.1可知骨化三醇缩短了荷瘤小鼠的生存时间。因此，我们观察在同一时间点，注射骨化三醇和对照试剂的荷瘤小鼠，脑组织和脾脏的外观以及重量的区别。按照2.2.10的方法构建同样的小鼠胶质瘤模型，并且我们在种瘤18天之后，同时取出注射骨化三醇和对照试剂荷瘤小鼠的脑组织和脾脏，然后进行拍照和称重。图3.3GL261肿瘤模型脑组织和脾脏分析A．对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脑组织；B.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠脑组织重量统计；C.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脾脏；D.对照组和注射骨化三醇组荷瘤小鼠的脾脏重量统计。（N=5，*P<0.05，ns无差异）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Protective links between vitamin D, inflammatory bowel disease and colon cancer[J]. Stacey Meeker,Audrey Seamons,Lillian Maggio-Price,Jisun Paik. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
本文编号：3526126
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