海马神经元TLR4介导的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路在神经炎症中的作用
发布时间：2021-12-11 23:53
目的通过原代培养的大鼠海马神经元,运用Toll样受体4（toll-like receptor 4,TLR4）的天然配体脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）或其他不同的工具药,以激活或阻断TLR4的作用,探讨海马神经元中是否存在TLR4介导的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路以及该信号通路的激活在神经炎症中的作用。揭示海马神经元中存在TLR4介导的PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路以及该信号通路的激活参与了神经炎症反应。为海马神经元TLR4介导的信号通路在神经炎症中的作用提供了更多的实验依据。方法采用原代培养7 d的新生大鼠海马神经元,细胞免疫荧光双标法鉴定海马神经元的纯度。应用TLR4的配体LPS、TLR4抗体或其他工具药预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4信号通路的作用。用Western Blot检测PTEN、AKT及其磷酸化水平;细胞免疫荧光双标法观察海马神经元中核因子κB/P65（nuclear factor-κB/P65,NF-κB/P65）核易位情况;酶联免疫吸附试验技术（Enzyme-linked immunosorbent as...
【文章来源】：南通大学江苏省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
扉页摘要
Abstract
第一章 绪论
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 仪器
2.1.3 药物与试剂
2.2 方法
2.2.1 海马神经元的培养
2.2.2 海马神经元的纯度鉴定
2.2.3 Western blot检测LPS刺激海马神经元PTEN、AKT蛋白及磷酸化蛋白的表达变化
2.2.4 细胞免疫荧光双标法检测NF-κB/P65的核易位情况
2.2.5 RT-qPCR技术检测LPS刺激及TLR4抗体、bpV（pic）和PDTC预处理后海马神经元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
2.2.6 RT-qPCR方法操作步骤
2.2.7 ELISA法检测海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
2.2.8 数据处理及统计分析
第三章 结果
3.1 原代培养的大鼠海马神经元的形态
3.2 海马神经元的纯度鉴定
3.3 Western blot检测不同浓度的LPS刺激 8、24、48 h后海马神经元PTEN、AKT蛋白的表达变化
3.3.1 不同浓度的LPS刺激海马神经元 8 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.3.2 不同浓度的LPS刺激海马神经元 24 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.3.3 不同浓度的LPS刺激海马神经元 48 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.4 Western Blot检测LPS剌激后对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.5 Western blot检测TLR4抗体阻断后对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.6 Western blot检测不同浓度的PTEN抑制剂bpV(pic)对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.7 细胞免疫荧光双标法检测大鼠海马神经元NF-κB/p65的核易位情况
3.8 RT-qPCR方法检测LPS刺激海马神经元不同时间后PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
3.8.1 LPS刺激不同时间PTEN、AKT mRNA表达变化
3.8.2 LPS刺激不同时间TNF-α、IL-1β mRNA表达变化
3.9 RT-qPCR方法检测TLR4抗体阻断后海马神经元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
3.10 PTEN的抑制剂bpV(pic)预处理对海马神经元TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响
3.11 NF-κB的拮抗剂PDTC预处理对海马神经元TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响
3.12 ELISA法检测海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
3.12.1 ELISA法检测LPS对海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β水平的影响
3.12.2 ELISA法测定TLR4抗体、PTEN抑制剂bpV（pic）和NF-κB拮抗剂PDTC预处理后对海马神经元培养上清液中TNF-α和IL-1β 水平的影响
第四章 讨论
4.1 海马神经元原代培养与纯度鉴定
4.2 LPS激活海马神经元TLR4对PTEN、AKT mRNA和蛋白表达的影响
4.3 LPS激活海马神经元TLR4对PTEN、AKT蛋白及其磷酸化蛋白的影响
4.4 LPS激活海马神经元TLR4对NF-κB核易位的影响
4.5 LPS激活海马神经元TLR4对TNF-α 和IL-1β 的影响
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
附录：攻读学位期间获得的主要荣誉
致谢
本文编号：3535624
【文章来源】：南通大学江苏省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
扉页摘要
Abstract
第一章 绪论
第二章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 仪器
2.1.3 药物与试剂
2.2 方法
2.2.1 海马神经元的培养
2.2.2 海马神经元的纯度鉴定
2.2.3 Western blot检测LPS刺激海马神经元PTEN、AKT蛋白及磷酸化蛋白的表达变化
2.2.4 细胞免疫荧光双标法检测NF-κB/P65的核易位情况
2.2.5 RT-qPCR技术检测LPS刺激及TLR4抗体、bpV（pic）和PDTC预处理后海马神经元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
2.2.6 RT-qPCR方法操作步骤
2.2.7 ELISA法检测海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
2.2.8 数据处理及统计分析
第三章 结果
3.1 原代培养的大鼠海马神经元的形态
3.2 海马神经元的纯度鉴定
3.3 Western blot检测不同浓度的LPS刺激 8、24、48 h后海马神经元PTEN、AKT蛋白的表达变化
3.3.1 不同浓度的LPS刺激海马神经元 8 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.3.2 不同浓度的LPS刺激海马神经元 24 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.3.3 不同浓度的LPS刺激海马神经元 48 h后PTEN、AKT蛋白表达变化
3.4 Western Blot检测LPS剌激后对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.5 Western blot检测TLR4抗体阻断后对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.6 Western blot检测不同浓度的PTEN抑制剂bpV(pic)对海马神经元PTEN、AKT及其磷酸化蛋白表达的影响
3.7 细胞免疫荧光双标法检测大鼠海马神经元NF-κB/p65的核易位情况
3.8 RT-qPCR方法检测LPS刺激海马神经元不同时间后PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
3.8.1 LPS刺激不同时间PTEN、AKT mRNA表达变化
3.8.2 LPS刺激不同时间TNF-α、IL-1β mRNA表达变化
3.9 RT-qPCR方法检测TLR4抗体阻断后海马神经元PTEN、AKT、TNF-α、IL-1β mRNA的表达变化
3.10 PTEN的抑制剂bpV(pic)预处理对海马神经元TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响
3.11 NF-κB的拮抗剂PDTC预处理对海马神经元TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响
3.12 ELISA法检测海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β 的水平
3.12.1 ELISA法检测LPS对海马神经元培养上清中TNF-α 和IL-1β水平的影响
3.12.2 ELISA法测定TLR4抗体、PTEN抑制剂bpV（pic）和NF-κB拮抗剂PDTC预处理后对海马神经元培养上清液中TNF-α和IL-1β 水平的影响
第四章 讨论
4.1 海马神经元原代培养与纯度鉴定
4.2 LPS激活海马神经元TLR4对PTEN、AKT mRNA和蛋白表达的影响
4.3 LPS激活海马神经元TLR4对PTEN、AKT蛋白及其磷酸化蛋白的影响
4.4 LPS激活海马神经元TLR4对NF-κB核易位的影响
4.5 LPS激活海马神经元TLR4对TNF-α 和IL-1β 的影响
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
附录：攻读学位期间获得的主要荣誉
致谢
本文编号：3535624
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3535624.html
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