FOXO4和FOSB在胶质瘤中的表达及作用机制研究

发布时间：2021-12-16 05:36

　　目的:本课题研究是以皖南医学院第一附属医院弋矶山医院神经外科和南京大学附属医院东部战区总医院神经外科收治的脑胶质瘤患者的手术标本为研究对象,旨在探讨转录因子人叉头框蛋白O4（FOXO4）和g0/g1转换调节蛋白3（FOSB）在胶质瘤中的表达,并进一步通过对体外胶质瘤细胞系（GBM）中FOXO4和FOSB的调控,观察两者对恶性细胞增殖和迁移表型的影响,寻找FOXO4和FOSB在胶质瘤中的作用,为临床上了解和治疗胶质瘤积累更多有价值的相关基础资料。方法:首先收集临床上确诊的脑胶质瘤病人在手术中切除的肿瘤组织标本,包括低级别胶质瘤标本（病理分级为WHOⅠ级和WHOⅡ级）和高级别胶质瘤标本（病理分级为WHOⅢ级和WHOⅣ级）,再以正常脑组织标本作为实验对照组。采用Western Blot和免疫组化染色法检测FOXO4和FOSB在不同级别胶质瘤和正常脑组织中的表达,并统计分析是否有差异。然后,在体外细胞系的培养中进一步验证。运用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western Blot检测正常人星形胶质细胞系（HA）和五种胶质母细胞瘤（GBM）细胞系（U251、U118、U87、T98G、... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各级别星型胶质细胞瘤组织FOXO4的表达，标尺=30μm(免疫组化法，×400)箭头所Ⅰ-ⅣFOXO420131-20181

21结果1FOXO4在胶质瘤中的表达及作用机制1.1FOXO4在人脑星型细胞瘤组织中的表达检测FOXO4在人脑星型细胞瘤组织中的表达（星型胶质细胞瘤为人脑胶质瘤中最常见的一种类型），所有星型细胞瘤患者术前均未接受任何抗肿瘤治疗，术后病理按WHO分级标准，用瘤周组织作为对照组。免疫组化学结果显示，肿瘤组织FOXO4的阳性表达率比瘤周正常脑组织低（图1）。随机在左上角的瘤周阳性表达的细胞中选取四个细胞，测得灰度值平均值为88.72。在右下角的肿瘤组织阳性表达的细胞中选取四个细胞，测量灰度值平均值为129.75。图1星型细胞瘤中FOXO4表达（免疫组化法×200）右侧箭头为FOXO4在肿瘤组织中阳性表达，左侧箭头为FOXO4在瘤周组织中的阳性表达。各级别胶质瘤免疫组化结果显示，Ⅰ级星形细胞瘤的FOXO4阳性表达高于其他三种级别（Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级），且Ⅱ级星型细胞瘤组织FOXO4阳性表达高于Ⅲ级和Ⅳ级星型细胞瘤（P＜0.05）。Ⅲ级星型细胞瘤组织FOXO4阳性表达高于Ⅳ级星型细胞瘤（P＜0.05）（图2、表1）。免疫荧光检测结果显示，FOXO4的阳性表达强度随着肿瘤级别的升高而降低，即低级别的星型胶质细胞瘤的FOXO4阳性表达率高于高级别星型胶质瘤细胞。通过免疫荧光检测发现FOXO4的表达定位于细胞浆和细胞核（图3）。图2各级别星型胶质细胞瘤组织FOXO4的表达，标尺=30μm(免疫组化法，×400)箭头所示为Ⅰ-Ⅳ级星形胶质细胞瘤组织中FOXO4阳性表达细胞（2013年1月-2018年1月行胶质瘤手术切除的星型胶质瘤标本27例，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级分别是5例、8例、10例、4例）。

22表1各级别星型胶质细胞瘤组织FOXO4阳性细胞的平均灰度值(sx)组别n灰度值FPWHOⅠ565.78±5.25aWHOⅡ8105.50±5.61b86.8240.000WHOⅢ10153.20±1.90cWHOⅣ4172.40±1.45d注：多组间两两比较。符号不同表示P＜0.05。图3星型细胞瘤组织FOXO4阳性表达（免疫荧光×400）1.2胶质瘤组织和GBM细胞中FOXO4在mRNA和蛋白质水平的下调我们首先使用qRT-PCR和WesternBlot分别检测了6个GBM组织、6个WHOⅡ级肿瘤组织和5个正常脑组织中FOXO4mRNA和蛋白的表达。WesternBlot结果显示，随着肿瘤病理分级的增加，GBM中FOXO4的表达明显降低，即低级别胶质瘤中FOXO4的表达明显低于正常脑组织（P＜0.01；图4A、B）。qRT-PCR分析结果显示，mRNA的水平，高级别胶质瘤组织标本中FOXO4表达比正常脑组织标本低约三倍（图4C）。此外，在体外GBM细胞中，FOXO4mRNA水平也明显低于HA细胞（P＜0.01；图4D）。这一结果显示体内外FOXO4的在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中的表达趋势相同，都高于正常组织和正常胶质细胞系。


本文编号：3537585