脐带间充质干细胞及细胞因子共移植治疗脑损伤的分子机理研究
发布时间：2021-12-19 01:36
第一章脐带间充质干细胞的分离培养鉴定及体外分化研究背景脐带间充质干细胞（Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,UC-MSCs）主要来自母体妊娠后的脐带,具有强大的细胞分化潜力和细胞增殖能力,其来源丰富,安全,不存在伦理问题且分化潜力较高在临床研究中具有很高的价值。脐带间充质干细胞在体外可被诱导分化为具有神经功能的细胞,在脐带干细胞移植治疗脑卒中等神经损伤疾病的研究中,给予大鼠静脉注射脐带间充质干细胞后,发现大鼠的运动行为明显改善。但脐带间充质干细胞治疗神经损伤类疾病的治疗机理仍不明确。研究目的1.体外获取脐带间充质干细胞并进行流式鉴定。2.利用细胞因子进行脐带间充质干细胞的体外成神经诱导分化并进行鉴定。3.模拟体内环境,构建脐带间充质干细胞体外炎症模型,探讨共移植细胞因子对脐带间充质干细胞的影响。研究方法1.脐带间充质干细胞的分离获取孕鼠脐带组织并使用PBS缓冲液洗净血液,将组织分割后加入胰酶消化并制备单细胞悬液,进行细胞计数。2.脐带间充质干细胞的培养将计数后的细胞,置入含有DMEM/F12的培养基中进行培养并传代。3.脐带间充质...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．分离培养的脐带间充质干细胞，分别在４倍，１０倍，２０倍镜下细胞生长??
当细胞生长至７０％？８０％时，去除培养基并使用ＰＢＳ洗涤细胞一次，加入诱导培养??基进行培养。收集培养到Ｐ５代体外诱导分化的细胞，分别进行固定，封闭，染色??等处理后在荧光显微镜下进行观察。如图３所示，体外诱导脐带间充质干细胞分??化，可表达神经胶质细胞标志物ＧＦＡＰ?（红色），神经细胞标志物Ｔｕｊｌ?（绿色）??以及核染色ＤＡＰＩ?（蓝色）。结果表明分选的脐带间充质干细胞在体外可被诱导??分化为神经胶质样细胞。??２６??
入共转染细胞因子检测其对脐带间充质干细胞增殖和凋亡的影响，ＷＢ结果显??示，共转染细胞因子可以促进细胞增殖相关蛋白Ｐｉ３ｋ，?Ａｋｔ的表达（Ｐ＜０．０１），??降低凋亡相关分子Ｃａｓｐａｓｅ３的表达（Ｐ＜０．０１）。如图５Ａ－Ｂ所示??Ｐ－ＰＢｋ??Ｈ?＾?ｍ？？??Ａ?Ｐ＜３ｋ??＝换娜??Ｐ－Ａｋｔ?—?相’ｓ?ｒ＾ｉ?＾??Ａｋｔ?－－??Ｃａｓｐａｓｅ３?｜｜ｌｊ??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?國：：?晒．：??ｎ狀挪瓶ｍ瓶預?Ｈ；?Ｈ?！Ｓ｜??Ｐｉ３ｋ?ＡＫ１?Ｃｎｐｎｅ３??图５．?Ａ－Ｂ）共移植细胞因子对脐带间充质干细胞增殖和凋亡相关分子Ｐｉ３ｋ，??ＡＫＴ，?Ｃａｓｐａｓｅ３表达的影响。??三、结论??１．
【参考文献】：
期刊论文
[1]脐带间充质干细胞在造血干细胞移植中作用的研究进展[J]. 乔淑敏,王易,宋秀玲,岳屹囡. 中国实验血液学杂志. 2017(06)
[2]Neural differentiation of human Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells improves the recovery of neurological function after transplantation in ischemic stroke rats[J]. Lei Zhang,Lin-mei Wang,Wei-wei Chen,Zhi Ma,Xiao Han,Cheng-ming Liu,Xiang Cheng,Wei Shi,Jing-jing Guo,Jian-bing Qin,Xiao-qing Yang,Guo-hua Jin,Xin-hua Zhang. Neural Regeneration Research. 2017(07)
[3]骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究[J]. 孙超,朱伟东,柳靖,姜华,陈明,张晓毅. 中华男科学杂志. 2017(05)
[4]Umbilical cord-derived mesenchymal stem cell transplantation combined with hyperbaric oxygen treatment for repair of traumatic brain injury[J]. Hai-xiao Zhou,Zhi-gang Liu,Xiao-jiao Liu,Qian-xue Chen. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[5]Human umbilical cord mesenchymal stem cell-loaded amniotic membrane for the repair of radial nerve injury[J]. Zhi Li,Hanjiao Qin,Zishan Feng,Wei Liu,Ye Zhou,Lifeng Yang,Wei Zhao,Youjun Li. Neural Regeneration Research. 2013(36)
[6]基质金属蛋白酶在骨髓间充质干细胞迁移和分化中的作用[J]. 李晓娜,宋关斌. 生物医学工程学杂志. 2012(02)
[7]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
本文编号：3543534
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．分离培养的脐带间充质干细胞，分别在４倍，１０倍，２０倍镜下细胞生长??
当细胞生长至７０％？８０％时，去除培养基并使用ＰＢＳ洗涤细胞一次，加入诱导培养??基进行培养。收集培养到Ｐ５代体外诱导分化的细胞，分别进行固定，封闭，染色??等处理后在荧光显微镜下进行观察。如图３所示，体外诱导脐带间充质干细胞分??化，可表达神经胶质细胞标志物ＧＦＡＰ?（红色），神经细胞标志物Ｔｕｊｌ?（绿色）??以及核染色ＤＡＰＩ?（蓝色）。结果表明分选的脐带间充质干细胞在体外可被诱导??分化为神经胶质样细胞。??２６??
入共转染细胞因子检测其对脐带间充质干细胞增殖和凋亡的影响，ＷＢ结果显??示，共转染细胞因子可以促进细胞增殖相关蛋白Ｐｉ３ｋ，?Ａｋｔ的表达（Ｐ＜０．０１），??降低凋亡相关分子Ｃａｓｐａｓｅ３的表达（Ｐ＜０．０１）。如图５Ａ－Ｂ所示??Ｐ－ＰＢｋ??Ｈ?＾?ｍ？？??Ａ?Ｐ＜３ｋ??＝换娜??Ｐ－Ａｋｔ?—?相’ｓ?ｒ＾ｉ?＾??Ａｋｔ?－－??Ｃａｓｐａｓｅ３?｜｜ｌｊ??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?國：：?晒．：??ｎ狀挪瓶ｍ瓶預?Ｈ；?Ｈ?！Ｓ｜??Ｐｉ３ｋ?ＡＫ１?Ｃｎｐｎｅ３??图５．?Ａ－Ｂ）共移植细胞因子对脐带间充质干细胞增殖和凋亡相关分子Ｐｉ３ｋ，??ＡＫＴ，?Ｃａｓｐａｓｅ３表达的影响。??三、结论??１．
【参考文献】：
期刊论文
[1]脐带间充质干细胞在造血干细胞移植中作用的研究进展[J]. 乔淑敏,王易,宋秀玲,岳屹囡. 中国实验血液学杂志. 2017(06)
[2]Neural differentiation of human Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells improves the recovery of neurological function after transplantation in ischemic stroke rats[J]. Lei Zhang,Lin-mei Wang,Wei-wei Chen,Zhi Ma,Xiao Han,Cheng-ming Liu,Xiang Cheng,Wei Shi,Jing-jing Guo,Jian-bing Qin,Xiao-qing Yang,Guo-hua Jin,Xin-hua Zhang. Neural Regeneration Research. 2017(07)
[3]骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究[J]. 孙超,朱伟东,柳靖,姜华,陈明,张晓毅. 中华男科学杂志. 2017(05)
[4]Umbilical cord-derived mesenchymal stem cell transplantation combined with hyperbaric oxygen treatment for repair of traumatic brain injury[J]. Hai-xiao Zhou,Zhi-gang Liu,Xiao-jiao Liu,Qian-xue Chen. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[5]Human umbilical cord mesenchymal stem cell-loaded amniotic membrane for the repair of radial nerve injury[J]. Zhi Li,Hanjiao Qin,Zishan Feng,Wei Liu,Ye Zhou,Lifeng Yang,Wei Zhao,Youjun Li. Neural Regeneration Research. 2013(36)
[6]基质金属蛋白酶在骨髓间充质干细胞迁移和分化中的作用[J]. 李晓娜,宋关斌. 生物医学工程学杂志. 2012(02)
[7]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
本文编号：3543534
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