Ad-HGF转染大鼠脑膜间皮细胞的效率与细胞活性研究

发布时间：2021-12-19 16:40

　　背景脑膜具有调节神经干／祖细胞（Neural stem/progenitor cell, NSPC）发育、分化与皮质神经再生的重要作用,其可诱导皮层NSPC激活反应和产生神经元,继而转为血管周细胞随微血管深入皮层,对胚胎发育及成年脑损伤后修复具有重要意义。肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor, HGF）为一独立的促血管生成因子,越来越多的研究显示其具有神经营养、促神经发生、血管发生、轴突发生、减少瘢痕形成以及促脑室管膜下区（Subventricular zone, SVZ）神经干细胞增殖、分化作用。我们进行Ad-HGF转染大鼠脑膜间皮细胞（rat meningeal mesothelial cells, RMMCs）的效率与细胞活性研究,期望为明确脑膜间皮细胞和HGF基因两者联合是否具有促血管新生和神经保护的双效作用提供实验基础,从而进一步为临床经蛛网膜下腔应用Ad-HGF治疗老年性缺血性脑血管病提供实验基础和理论依据。目的体外原代培养SD大鼠脑膜间皮细胞并鉴定,用Ad5-EGFP、Ad-HGF转染RMMCs,测定重组腺病毒转染细胞的最佳MOI值,观察转染后... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 主要试剂
    1.3 主要仪器
    1.4 主要试剂的配制
    1.5 实验方法
        1.5.1 大鼠脑膜间皮细胞的体外培养
        1.5.2 大鼠脑膜间皮细胞的鉴定
        1.5.3 Ad5-EGFP转染大鼠脑膜间皮细胞的最佳MOI值测定
        1.5.4 酶联免疫吸附法(ELISA)对HGF的表达进行测定
        1.5.5 噻唑兰(MTT)比色法对Ad-HGF转染后大鼠脑膜间皮细胞增殖能力的测定
        1.5.6 Ad-HGF转染后大鼠脑膜间皮细胞迁移能力的测定
    1.6 统计学分析
2 结果
    2.1 大鼠脑膜间皮细胞的体外培养
        2.1.1 脑膜间皮细胞原代培养及倒置相差显微镜下细胞形态学观察
        2.1.2 大鼠脑膜间皮细胞传代培养
    2.2 大鼠脑膜间皮细胞的鉴定
        2.2.1 倒置相差显微镜下观察细胞形态
        2.2.2 免疫细胞化学染色法鉴定结果
        2.2.3 细胞间接免疫荧光染色法鉴定结果
    2.3 Ad5-EGFP转染大鼠脑膜间皮细胞最佳MOI值测定结果
        2.3.1 荧光显微镜观察法测定结果
        2.3.2 流式细胞仪检测法测定结果
    2.4 酶联免疫吸附法对HGF表达的测定结果
        2.4.1 标准曲线绘制
        2.4.2 不同MOI值的Ad-HGF转染脑膜间皮细胞后48h上清液中HGF含量测定结果
        2.4.3 Ad-HGF转染脑膜间皮细胞后不同时间点条件培养液中HGF含量测定结果
    2.5 MTT比色法对Ad-HGF转染后脑膜间皮细胞增殖能力测定结果
    2.6 Ad-HGF转染后大鼠脑膜间皮细胞迁移能力测定结果
        2.6.1 细胞划痕实验结果
        2.6.2 Transwells细胞迁移实验结果
3 讨论
    3.1 脑膜间皮细胞的分离培养和扩增
        3.1.1 脑膜间皮细胞的概念
        3.1.2 脑膜在中枢神经系统促神经发育、分化和皮质神经再生的功能研究
        3.1.3 大鼠脑膜间皮细胞的培养与鉴定
    3.2 Ad-HGF转染脑膜间皮细胞的效率及对细胞增殖、迁移能力的影响
        3.2.1 HGF的基本性状及生物学功能
        3.2.2 基因转染载体的选择
        3.2.3 本课题结果分析
4 结论
附图
参考文献
综述：HGF基因治疗缺血性脑血管病的实验研究进展
    参考文献
附录
攻读学位期间发表文章情况
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
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[2]血液稀释对脑氧代谢影响的研究进展[J]. 沈华春,郭建荣.  医学综述. 2012(02)
[3]肝细胞生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移的影响[J]. 常冰梅,李美宁,刘志贞,张悦红,程牛亮,牛勃.  中国免疫学杂志. 2011(08)
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[5]骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管病的研究进展[J]. 潘晓华,刘国荣,姜长春.  内蒙古医学杂志. 2010(09)
[6]缺血性脑血管病患者血清肝细胞生长因子含量变化及其临床意义[J]. 王海燕,杜建时,徐忠信,赵明明,王宇,马明,赵晴.  中国老年学杂志. 2010(14)
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[8]改良法体外培养大鼠脑膜间皮细胞[J]. 魏丽红,韩素改,李彤.  神经解剖学杂志. 2009(04)
[9]脑膜功能的研究进展[J]. 王婷,赵华洲,王百忍.  解剖学杂志. 2008(03)
[10]Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应[J]. 哈小琴,吕同德,赵治华,唐瑜,昌业伟.  第四军医大学学报. 2008(04)



本文编号：3544715