ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探

发布时间：2021-12-24 14:42

　　研究表明,雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。雌激素主要与雌激素受体结合,通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。新近发现的ER-a36是ER-a一个亚型,它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中,并可介导膜起始的雌激素信号通路。本室前期研究发现,ER-a36也广泛表达在脑内多个区域,但作用尚不明确。 本实验利用RNA干扰技术建立的ER-a36基因敲低细胞系,通过免疫细胞化学、免疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Western blot等方法,探讨了ER-α36在PC12细胞血清营养剥夺耐受性中的作用,为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验依据。 结果： 1.原代培养不同时间的皮层和海马神经元中均有ER-α36表达,且主要分布在胞浆和胞膜上,并与Caveolin-1共定位。原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高,NSE免疫阳性率均达到97%。 2.PC12细胞对血清营养剥夺的耐受具有明显的时间和血清浓度依赖性。细胞在含2.5%血清的无酚红培养基中生长速度减慢,其存活率与正常培养PC12细胞相比显著降低,以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外,细胞在血清剥夺(...

【文章来源】： 辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：61 页

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
引言
1 文献综述
    1.1 雌激素在脑内的合成分泌
    1.2 雌激素受体依赖与非依赖的作用方式
        1.2.1 雌激素受体依赖的作用方式
        1.2.2 雌激素受体非依赖的作用方式
    1.3 雌激素在不同中枢神经系统疾病中的作用
        1.3.1 雌激素与阿尔茨海默氏病
        1.3.2 雌激素与帕金森氏病
        1.3.3 雌激素与缺血性脑卒中
    1.4 展望
2 ER-α36在原代培养的大鼠皮层、海马神经元不同发育时期的表达及胞内分布
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料、试剂与仪器
        2.2.2 实验方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 原代培养的大鼠皮层神经元和海马神经元的鉴定
        2.3.2 ER-α36在原代培养的大鼠皮层神经元不同发育时期的表达及胞内分布
        2.3.3 ER-α36在原代培养的大鼠海马神经元不同发育时期的表达及胞内分布
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 血清营养剥夺（低血清）细胞模型的建立及其对低血清的耐受特征
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料、试剂与仪器
        3.2.2 实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 血清营养剥夺PC12细胞模型的建立
        3.3.2 血清营养剥夺PC12细胞对低血清的耐受特征
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 ER-α36敲低对细胞的低浓度E₂敏感性和血清剥夺耐受性的影响
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料、试剂与仪器
        4.2.2 实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 PC12细胞生长的E₂依赖与非依赖性特征
        4.3.2 ER-α36对低浓度E₂敏感性的影响
        4.3.3 ER-α36对血清营养剥夺耐受性的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
5 ER-α36敲低对PC12细胞增殖信号通路的影响
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 材料、试剂与仪器
        5.2.2 实验方法
    5.3 实验结果
        5.3.1 ER-α36介导的不同浓度的E₂的转录激活
        5.3.2 ER-α36参与血清营养剥夺细胞增殖和存活信号通路的激活
        5.3.3 ER-α36介导E₂激活的MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路的交叉对话
        5.3.4 ER-α36对不同浓度E₂激活的MAPK信号通路的影响
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
参考文献
附录A 缩略词
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]Caveolin-1 gene silencing promotes the activation of PI3K/AKT dependent on Erα36 and the transformation of MCF10ACE [J]. FENG Shuang1,WANG Yang1,WANG Xi1,WANG ZhaoYi3,CUI YuYing1,LIU Jing4,ZHAO ChunHui1,JIN Mei1,2 & ZOU Wei1,2 1 College of Life Science,Liaoning Normal University,Dalian 116029,China;2 Liaoning Key Laboratory of Biotechnology and Molecular Drug R&D,Dalian 116029,China;3 Cancer Center,Creighton University,2500 California Plaza,Omaha,NE 68178,USA; 4 First Clinical Hospital of Dalian Medical University,Dalian 116011,China.  Science China(Life Sciences). 2010(05)
[3]阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白神经毒性作用研究进展 [J]. 陈祥,钟翎.  中国神经精神疾病杂志. 2008(05)
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[6]大鼠脑内caveolin-1蛋白的表达及其在分辨学习中的作用 [J]. 邹伟,王红霞,刘晶,张洪,安利佳.  生理学报. 2006(05)
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本文编号：3550668