新基因HESRG在人胚胎干细胞中的功能、表达调控及其在人类颅内肿瘤的表达

发布时间：2021-12-28 03:49

　　干细胞（stem cells）是一类具有自我更新和多分化潜能的细胞。根据其来源可分为胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES cells）和成体干细胞（adult stem cells）。胚胎干细胞是由早期囊胚的内细胞团或原始生殖细胞中分离获得的具有多潜能性特征的细胞。胚胎干细胞在适合的条件下能够分化为机体的内、中、外三个胚层来源的所有组织细胞,其研究不仅在认识细胞分化、胚胎发育机理具有重要作用,而且对基因功能研究、转基因动物制备、克隆动物、建立动物和人类疾病模型、药物的开发与筛选、肿瘤发生发展机制和治疗方法探讨、细胞组织和器官的修复和移植治疗等方面研究有着极其重要的价值。人胚胎干细胞系（human embryonic stem cell lines, hES cells）最早于1998年由Thomoson JA等人成功建立,该成果被评为“1999年世界十大科技进展之首”,此后十余年来,干细胞领域出现了很多令人振奋的研究成果,由此掀起了世界范围的干细胞研究热潮。至今,胚胎干细胞及各种成体干细胞的研究是目前生物学和医学领域的热点和前沿。人类胚胎干细胞具备有自我更新及多... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：151 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮写词简表
前言
技术路线图
    人类胚胎干细胞培养及HESRG在hES细胞中表达
    利用Si-RNA干扰技术研究HESRG在hES细胞中的功能
    WNT信号通路与HESRG
    HESRG在颅内生殖细胞类肿瘤中的表达
第一章 人胚胎干细胞培养鉴定以及HESRG的表达
    第一节 材料与方法
        1. 实验材料与试剂
        2. 方法
    第二节 结果
        1. 人类胚胎干细胞培养
        2. 人胚胎干细胞未分化标志物染色
        3. RT-PCR、Real-time PCR检测HESRG在人胚胎干细胞中的表达
        4. 间接免疫荧光检测HESRG在人胚胎干细胞及小鼠胚胎干细胞中的表达
        5. RT-PCR、Real-time PCR检测HESRG在自发分化的人胚胎干细胞中的表达
        6. 间接免疫荧光检测HESRG在自发分化的人胚胎干细胞中的表达
    第三节 讨论
        实验研究的胚胎干细胞细胞模型的特征
        人胚胎干细胞H1及H9系
        人胚胎干细胞培养过程中的提醒
        hES细胞细胞状态恶化的评价
        MEF饲养层细胞制备过程的注意事项
        hES细胞传代时机的选择
        人胚胎干细胞自我复制及亚全能性维持的分子机制
        人胚胎干细胞相关基因HESRG
        HESRG在人胚胎干细胞中的表达
    第四节 结论
    参考文献
第二章 利用化学合成的siRNA干扰技术研究HESRG在人胚胎干细胞中的功能
    第一节 材料和方法
        1. 实验材料与试剂
        2. 方法
    第二节 结果
        1. Si-HESRG特异性干扰HESRG的干扰效率
        2. HESRG表达下调后hES细胞的形态学改变
        3. Real-time PCR检测HESRG下调后48小时神经分化标志物的表达
        4. 免疫荧光检测HESRG下调后48小时神经分化标志物的表达
        5. 免疫荧光检测HESRG下调后12天神经分化标志物的表达
    第三节 讨论与分析
        HERSG参与hES细胞的自我更新和亚全能性维持
        HESRG抑制hES细胞神经分化
        HESRG通过抑制hES细胞的神经谱系分化维持hES细胞的自我更新及多潜能性
        HESRG参与ES细胞自我更新及亚全能性维持的分子机制模型
        BMP途径可能通过HESRG对hES细胞的神经分化产生影响
    第四节 结论
    参考文献
第三章 WNT信号通路对HESRG的调控研究
    第一节 材料与方法
        1. 实验材料与试剂
        2. 方法
    第二节 结果
        1. HESRG转录起始位点上游2000bp序列WNT信号通路转录因子结合位点的生物信息学预测
        2. GSK-3特异性竞争性抑制剂BIO维持hES细胞未分化状态及HESRG的高表达
        3. 荧光素酶报告质粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp的载体构建过程
        4. 转染pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp于hES细胞测定HESRG启动子区域活性
        5. BIO激活WNT信号通路维持HESRG启动子区域活性
        6. TCF家族在hES细胞中的表达丰度
        7. si-RNA干扰TCF-3的特异性靶位选择
        8. 特异性干扰TCF-3维持HESRG的高表达水平
        9. 共转染荧光素酶报告质粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp及Si-TCF-3-1050
        10. 核染色质免疫共沉淀(CHIP)确定TCF-3与HESRG基因启动子区域的结合
    第三节 讨论
        TESS预测WNT信号通路对HESRG的调节作用
        经典WNT信号通路
        GSK-3特异性抑制剂BIO激活WNT信号通路并维持HESRG在hES细胞中的表达
        WNT信号通路通过作用于HESRG启动子区域发挥维持HESRG的作用
        利用焚光素酶报告载体质粒检测WNT信号通路对HESRG启动子区域的调控
        WNT信号通路对HESRG的调控通过作用于HESRG启动子区域的TCF蛋白产生
        核染色质免疫共沉淀法提供WNT信号通路对HESRG直接调控的证据
        HESRG参与的信号通路
    第四节 结论
    参考文献
第四章 HESRG在颅内肿瘤中的表达研究
    第一节 材料与方法
        1. 组织标本
        2. 组织切片
        3. hES细胞培养
        4. RT-PCR and Real-time PCR
        5. 免疫组织化学及免疫细胞化学
    第二节 结果
        1. RT-PCR检测HESRG在中枢神经系统中的表达分布情况
        2. Real-time PCR检测HESRG在中枢神经系统中的表达分布情况
        3. HESRG蛋白在中枢神经系统肿瘤中的表达
    第三节 讨论
    第四节 结论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3553340