TREK-1过表达与脉络宁注射液对氧糖剥夺星形胶质细胞及其谷氨酸代谢的作用

发布时间：2021-12-31 19:35

　　目的:观察双孔钾通道TREK-1过表达及脉络宁注射液对氧糖剥夺星型胶质细胞（astrocyte,Ast）存活率和谷氨酸（Glu）摄取能力的影响,探讨TREK-1在Glu兴奋性毒性中的调节作用。方法:原代培养大鼠星形胶质细胞,运用DNA质粒转染法构建星形胶质细胞TREK-1过表达模型,采用细胞氧糖剥夺（Oxygen Glucose Deprivation,OGD）模型,模拟体内脑缺血环境,实验分为对照组、TREK-1过表达组、脉络宁注射液组,分别于氧糖剥夺2h、4h、6h、8h后,MTT法检测细胞增殖率;FITC/Propidium Iodide双染色法和Hoechast 33258染色法检测细胞凋亡;Glu检测试剂盒法检测细胞摄取率;RT-PCR法检测Glu特异性转运体GLT-1、嘌呤能受体P2X7、谷氨酰胺合酶（GS）、凋亡信号因子Caspase-3和TREK-1通道的表达变化。结果:1.运用大鼠TREK-1 DNA重组质粒转染星形胶质细胞,TREK-1过表达模型构建成功;2.在生理条件下,TREK-1过表达及脉络宁液对星形胶质细胞活性无明显影响,而在氧糖剥夺后,TREK-1过表达及... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 实验部分
    1 材料
        1.1 动物
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配制
    2 方法
        2.1 星形胶质细胞的提取
        2.2 星形胶质细胞传代
        2.3 TREK-1 过表达模型建立
        2.4 GFAP/TREK-1+DAPI免疫荧光双标记染色
        2.5 OGD模型的建立
        2.6 分组
        2.7 不同OGD时间星形胶质细胞抑制率的检测
        2.8 FITC/Propidium Iodide双染色法检测细胞凋亡率
        2.9 Hoechst33258检测细胞凋亡形态
        2.10 谷氨酸摄取能力检测
        2.11 Real-time PCR 检测 TREK-1、GS、GLT-1、P2X7、Caspase-3 表达量
        2.12 统计学方法
    3 结果
        3.1 星形胶质细胞原代培养
        3.2 GFAP/TREK-1+DAPI免疫荧光双标记染色
        3.3 星形胶质细胞抑制率检测
        3.4 FITC/Propidium Iodide双染色法检测细胞凋亡率
        3.5 Hoechst33258染色法检测凋亡细胞形态
        3.6 谷氨酸摄取率
        3.7 Real-time PCR 法检测星形胶质细胞 GS，GLT-1 mRNA 相对表达量
        3.8 Real-time PCR 法检测星形胶质细胞 P2X7、Caspase-3 mRNA 相对表达量
        3.9 Real-time PCR 法检测星形胶质细胞 TREK-1 mRNA 相对表达量
    4 讨论
        4.1 TREK-1 过表达模型的可靠性分析
        4.2 TREK-1 对星形胶质细胞存活率的影响
        4.3 TREK-1 对星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响
        4.4 脉络宁注射液治疗缺血缺氧性脑病中的作用及其作用机制
        4.5 TREK-1 的在脑缺血中的可能作用机制，及脉络宁注射液治疗脑缺血的作用机制与TREK-1 的关系
第二章 结论
    1 结论
    2 不足和展望
文献综述：双孔钾通道TREK-1 相关疾病的研究进展
    1 TREK-1 的结构特点
    2 TREK-1 的分布
    3 TREK-1 的调控
    4 TREK-1 与神经系统相关疾病及机制
        4.1 TREK-1 与缺血性脑病
        4.2 TREK-1 与癫痫
        4.3 TREK-1 与抑郁症
        4.4 TREK-1 与麻醉、疼痛
    5 TREK-1 与心血管系统疾病
    6 TREK-1 与肺部疾病
    7 TREK-1 与妇科疾病
    8 TREK-1 与肿瘤
    9 TREK-1 与其他相关疾病
    10 结语与展望
参考文献
在学期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]兴奋性氨基酸毒性与缺血性脑中风及针刺的调整作用[J]. 李潇潇,卢圣锋,朱冰梅,傅淑平.  针刺研究. 2016(02)
[2]脑卒中发病环境因素分析及干预[J]. 郑子苹.  数理医药学杂志. 2016(04)
[3]脉络宁注射液的化学成分研究（Ⅰ）[J]. 陈斌,蔡巍,刘芳,刘中博.  中南药学. 2016(03)
[4]人类脑计划的研究进展[J]. 王亚,李永欣,黄文华.  中国医学物理学杂志. 2016(02)
[5]血栓通与脉络宁注射液治疗脑梗死的疗效对比分析[J]. 刘金凤.  中国医药指南. 2016(02)
[6]子宫平滑肌中双孔钾离子通道TREK-1研究进展[J]. 何文竹,尹宗智,魏兆莲.  现代妇产科进展. 2015(12)
[7]脉络宁注射液对缺血性中风血管内皮细胞损伤修复效果的观察[J]. 吴宏伟,李世英,胡岱君,刘仁斌.  中国中医急症. 2015(10)
[8]二十二碳六烯酸下调心房颤动大鼠心房肌细胞双孔内向整流相关性钾通道-1的表达[J]. 唐碧,高大胜,侯秀杰,史晓俊,王洪巨,单锋.  蚌埠医学院学报. 2014(08)
[9]双孔钾通道TREK-1活性对缺氧条件下星形胶质细胞增殖的影响[J]. 吴潇,唐荣华,谢敏杰.  神经损伤与功能重建. 2012(04)
[10]脉络宁注射液对人血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用[J]. 李娜,吴世政,张淑坤.  中国新药杂志. 2012(11)

博士论文
[1]经鼻给予脑源性神经营养因子治疗大鼠缺血性脑卒中[D]. 姜永军.南京大学 2012
[2]双孔钾通道TREK-1的表达与调控对脑缺血损伤时星形胶质细胞功能和神经元损伤的影响及机制研究[D]. 吴潇.华中科技大学 2012



本文编号：3560842