PRMT2抑制LPS诱导的小胶质细胞M1型极化及机制研究
发布时间：2022-01-08 20:52
【研究背景与目的】大量研究表明,脑内以小胶质细胞活化为特征的慢性炎症反应是神经退行性疾病的重要标志,M1型极化的小胶质细胞具有促进神经炎症和神经毒性的作用,而M2型极化具有抗炎和促进组织修复作用。小胶质细胞M1型和M2型之间的平衡对神经炎症性相关疾病的进展有重要作用,因此探讨小胶质细胞在什么条件下可以从M1型促炎状态转变成M2型抗炎状态将对治疗这类疾病有重要启示作用。我们前期的研究发现PRMT2可能参与LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,但是其机制不清。本研究通过观察蛋白质精氨酸甲基转移酶2（Protein arginine methyltransferase 2,PRMT2）对脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）诱导N9小胶质细胞极化的影响,并探讨其可能的机制,为防治神经炎症相关类疾病提供新的靶点。【方法】体外培养小鼠来源的N9小胶质细胞株。将表达PRMT2的慢病毒载体LV-PRMT2（4952-1）转染到N9小胶质细胞上作为实验组,对照组转染空载慢病毒载体,没有转染慢病毒载体的小胶质细胞作为完全对照组。细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS下调小胶质细胞中PRMT2的表达Figure3.1LPSdown-regulatedPRMT2expressioninmicroglia.Relativeexpressionlevelof
14中LV-PRMT2组表示过表达PRMT2的N9小胶质细胞；LV-empty组表示转染空白慢病毒载体的N9小胶质细胞。图3.2成功转染慢病毒载体的N9小胶质细胞Figure3.2TheN9microgliaweresuccessfullytransfectedwiththelentiviralvector.(a)TheN9microgliasuccessfullytransfectedwithlentiviralvectorshowedgreenfluorescence.(b)RelativeexpressionlevelofPRMT2.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).***P<0.001.3.3转染慢病毒载体和LPS处理对N9小胶质细胞的活力没有影响接下来我们用MTT检测转染慢病毒载体是否会影响小胶质细胞的活力，以排除病毒转染对细胞活力的影响。结果如图3.3所示，Control、LV-empty、LV-PRMT2这三组间的细胞活力没有显著差异（P＞0.05），说明转染慢病毒载体对小胶质细胞的活力没有影响。根据我们课题组的前期研究，我们选择LPS（2μg/mL）诱导体外神经炎症模型，接下来我们检测LPS是否对control，LV-empty，LV-PRMT2这三组的细胞活力有影响。用LPS（2μg/mL）处理各组N9小胶质细胞6h，然后用MTT试剂盒检测。结果如图3.3所示：各组细胞活力均无明显差异（P＞0.05），说明我们所选的LPS浓度不会对各组细胞造成损伤。
15因此接下来的实验中LPS的浓度均为2μg/mL。图3.3转染慢病毒载体和LPS对N9小胶质细胞活力的影响Figure3.3EffectsoflentiviralvectortransfectionandLPSonthecellviabilityofN9microglia.Therewasnosignificantdifferenceincellviabilityamongthegroups.TransfectionwithlentiviralvectorandLPShasnoeffectontheviabilityofN9microglia.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).3.4过表达PRMT2调控LPS处理的N9小胶质细胞极化3.4.1过表达PRMT2抑制LPS诱导的N9小胶质细胞M1型极化我们用LPS（2μg/mL）处理小胶质细胞6h构建体外炎症模型，然后WB检测各组细胞炎症因子的表达，结果如图3.4所示：LPS处理后，与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性上调（P<0.001）；与LV-PRMT2组相比，LV-PRMT2+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性上调（P<0.05）；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性下调（P<0.05）。这一结果说明LPS诱导小胶质细胞的M1型极化并促进炎症因子的释放；而过表达PRMT2可以逆转LPS诱导的小胶质细胞M1型极化，减少炎症因子的分泌。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Interleukin-4 affects microglial autophagic flux[J]. Run-Hong Tang,Rui-Qun Qi,Hua-Yan Liu. Neural Regeneration Research. 2019(09)
[2]多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3Ⅱ及p62表达的影响[J]. 魏砚明,任晋宏,栾智华,王永辉. 中国药科大学学报. 2018(03)
[3]LC3基因在细胞自噬过程中的表达研究[J]. 倪志华,张玉明,邓传怀,赵泽,张瑞英,周艳芬. 湖北农业科学. 2015(20)
[4]Dysfunction of autophagy as the pathological mechanism of motor neuron disease based on a patient-specific disease model[J]. Dan-Jing Yang,Liang Zhu,Jie Ren,Rong-Jie Ma,Hongwen Zhu,Jun Xu. Neuroscience Bulletin. 2015(04)
[5]自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌中的表达及临床意义[J]. 张创杰,张连峰,周琳. 世界华人消化杂志. 2015(02)
本文编号：3577262
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS下调小胶质细胞中PRMT2的表达Figure3.1LPSdown-regulatedPRMT2expressioninmicroglia.Relativeexpressionlevelof
14中LV-PRMT2组表示过表达PRMT2的N9小胶质细胞；LV-empty组表示转染空白慢病毒载体的N9小胶质细胞。图3.2成功转染慢病毒载体的N9小胶质细胞Figure3.2TheN9microgliaweresuccessfullytransfectedwiththelentiviralvector.(a)TheN9microgliasuccessfullytransfectedwithlentiviralvectorshowedgreenfluorescence.(b)RelativeexpressionlevelofPRMT2.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).***P<0.001.3.3转染慢病毒载体和LPS处理对N9小胶质细胞的活力没有影响接下来我们用MTT检测转染慢病毒载体是否会影响小胶质细胞的活力，以排除病毒转染对细胞活力的影响。结果如图3.3所示，Control、LV-empty、LV-PRMT2这三组间的细胞活力没有显著差异（P＞0.05），说明转染慢病毒载体对小胶质细胞的活力没有影响。根据我们课题组的前期研究，我们选择LPS（2μg/mL）诱导体外神经炎症模型，接下来我们检测LPS是否对control，LV-empty，LV-PRMT2这三组的细胞活力有影响。用LPS（2μg/mL）处理各组N9小胶质细胞6h，然后用MTT试剂盒检测。结果如图3.3所示：各组细胞活力均无明显差异（P＞0.05），说明我们所选的LPS浓度不会对各组细胞造成损伤。
15因此接下来的实验中LPS的浓度均为2μg/mL。图3.3转染慢病毒载体和LPS对N9小胶质细胞活力的影响Figure3.3EffectsoflentiviralvectortransfectionandLPSonthecellviabilityofN9microglia.Therewasnosignificantdifferenceincellviabilityamongthegroups.TransfectionwithlentiviralvectorandLPShasnoeffectontheviabilityofN9microglia.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).3.4过表达PRMT2调控LPS处理的N9小胶质细胞极化3.4.1过表达PRMT2抑制LPS诱导的N9小胶质细胞M1型极化我们用LPS（2μg/mL）处理小胶质细胞6h构建体外炎症模型，然后WB检测各组细胞炎症因子的表达，结果如图3.4所示：LPS处理后，与LV-empty组相比，LV-empty+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性上调（P<0.001）；与LV-PRMT2组相比，LV-PRMT2+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性上调（P<0.05）；与LV-empty+LPS组比较，LV-PRMT2+LPS组细胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表达水平均显著性下调（P<0.05）。这一结果说明LPS诱导小胶质细胞的M1型极化并促进炎症因子的释放；而过表达PRMT2可以逆转LPS诱导的小胶质细胞M1型极化，减少炎症因子的分泌。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Interleukin-4 affects microglial autophagic flux[J]. Run-Hong Tang,Rui-Qun Qi,Hua-Yan Liu. Neural Regeneration Research. 2019(09)
[2]多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3Ⅱ及p62表达的影响[J]. 魏砚明,任晋宏,栾智华,王永辉. 中国药科大学学报. 2018(03)
[3]LC3基因在细胞自噬过程中的表达研究[J]. 倪志华,张玉明,邓传怀,赵泽,张瑞英,周艳芬. 湖北农业科学. 2015(20)
[4]Dysfunction of autophagy as the pathological mechanism of motor neuron disease based on a patient-specific disease model[J]. Dan-Jing Yang,Liang Zhu,Jie Ren,Rong-Jie Ma,Hongwen Zhu,Jun Xu. Neuroscience Bulletin. 2015(04)
[5]自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌中的表达及临床意义[J]. 张创杰,张连峰,周琳. 世界华人消化杂志. 2015(02)
本文编号：3577262
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3577262.html
最近更新
教材专著
