Sirt3在红藻氨酸诱导癫痫发生中的作用及机制研究
发布时间：2022-01-17 12:45
癫痫是一种常见的神经性疾病,往往会给人们生活带来巨大的影响。大脑受到损伤后,诱发神经炎症和活性氧并累积,从而促进了癫痫的发生发作并持续存在。癫痫的发生又进一步加重氧化应激,形成恶性循环。Sirt3是一个种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的Ⅲ类去乙酰化酶,通过对相关线粒体蛋白脱乙酰化来保证线粒体功能完整性,其在癫痫中的作用尚不明确。本课题拟通过Sir3基因敲除小鼠来探究Sirt3在癫痫发生中的作用,并研究其发挥的作用机制。目的:红藻氨酸（kainic acid,KA）致痫后,比较Sir3基因敲除小鼠和野生型小鼠癫痫发作严重程度及对学习记忆的损害,并从氧化应激方面探究其可能机制。方法:以Sirt3基因敲除小鼠和C57BL/6野生型小鼠为对象,腹腔注射KA（22mg/kg）建立癫痫模型,并记录其癫痫发作潜伏时间,发作最高等级;蛋白免疫印迹,RT-PCR检测相关蛋白表达;FJB染色观察脑内海马区域神经元死亡情况;DCFH-DA探针检测脑内的ROS活性;Morris水迷宫、旷场检测小鼠学习记忆能力和焦虑抑郁状态。以N2A细胞作为体外研究对象,KA给药建立癫痫模型;Si-RNA利用Lipo3000转染试...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sirtuins家族成员脱乙酰基过程
KA给药24小时能引起C57BL/6小鼠Sirt3表达显著下降
浙江大学硕士论文实验结果18如图4所示，Sirt3基因敲除小鼠（KO）的发作潜伏时间明显长于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）；Sirt3基因敲除小鼠（KO）的发作最高等级明显低于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）。以上结果提示，敲除Sirt3对癫痫的发生有保护作用。图4敲除Sirt3延长小鼠癫痫发作时间，降低小鼠癫痫发作最高等级Figure4Sirt3deficiencyprolongtheseizurelatencyanddecreasetheseizureseverity腹腔注射KA后开始计时，记录小鼠癫痫发作情况。图A为小鼠的癫痫发作潜伏期统计图，图B为2h内小鼠癫痫发作最高等级统计图。*表示与WT组比P<0.05。(WT:n=23，KO:n=19)3.3敲除Sirt3对脑内氧化应激的影响根据前面的结果，在癫痫发作24h后，脑内Sirt3表达显著降低。因此，我们选取癫痫发作24h为时间节点，以Sirt3基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠为研究对象，腹腔注射KA建立癫痫模型。癫痫发作24h后，断头取海马组织，检测海马内氧化应激状态。以ROS含量和乙酰化SOD表达为检测指标来观察敲除Sirt3后，脑内氧化应激的变化。ROS是是自由基的一种，若其在细胞内得不到及时清除，会导致氧化应激[20]。超氧化物歧化酶SOD是生物体内一种抗氧化酶，是线粒体内ROS主要清除剂。SOD有两种修饰状态，分别为乙酰化和脱乙酰化形式。通常其脱乙酰化形式有生物学活性，能清除ROS，所以其乙酰化形式表达越高，清除ROS能力越弱[25]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of sirtuins in ischemia-reperfusion injury[J]. Eirini Pantazi,Mohamed Amine Zaouali,Mohamed Bejaoui,Emma Folch-Puy,Hassen Ben Abdennebi,Joan Roselló-Catafau. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
本文编号：3594751
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sirtuins家族成员脱乙酰基过程
KA给药24小时能引起C57BL/6小鼠Sirt3表达显著下降
浙江大学硕士论文实验结果18如图4所示，Sirt3基因敲除小鼠（KO）的发作潜伏时间明显长于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）；Sirt3基因敲除小鼠（KO）的发作最高等级明显低于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）。以上结果提示，敲除Sirt3对癫痫的发生有保护作用。图4敲除Sirt3延长小鼠癫痫发作时间，降低小鼠癫痫发作最高等级Figure4Sirt3deficiencyprolongtheseizurelatencyanddecreasetheseizureseverity腹腔注射KA后开始计时，记录小鼠癫痫发作情况。图A为小鼠的癫痫发作潜伏期统计图，图B为2h内小鼠癫痫发作最高等级统计图。*表示与WT组比P<0.05。(WT:n=23，KO:n=19)3.3敲除Sirt3对脑内氧化应激的影响根据前面的结果，在癫痫发作24h后，脑内Sirt3表达显著降低。因此，我们选取癫痫发作24h为时间节点，以Sirt3基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠为研究对象，腹腔注射KA建立癫痫模型。癫痫发作24h后，断头取海马组织，检测海马内氧化应激状态。以ROS含量和乙酰化SOD表达为检测指标来观察敲除Sirt3后，脑内氧化应激的变化。ROS是是自由基的一种，若其在细胞内得不到及时清除，会导致氧化应激[20]。超氧化物歧化酶SOD是生物体内一种抗氧化酶，是线粒体内ROS主要清除剂。SOD有两种修饰状态，分别为乙酰化和脱乙酰化形式。通常其脱乙酰化形式有生物学活性，能清除ROS，所以其乙酰化形式表达越高，清除ROS能力越弱[25]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of sirtuins in ischemia-reperfusion injury[J]. Eirini Pantazi,Mohamed Amine Zaouali,Mohamed Bejaoui,Emma Folch-Puy,Hassen Ben Abdennebi,Joan Roselló-Catafau. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
本文编号：3594751
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